[發明專利]一種大黃藤莖段組培快繁方法

在審

• 申請號: 202010176999.0
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111149705A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 沈孝明;曾祥飛
• 申請（專利權）人: 云南珍逸德農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 和琳

本發明涉及一種中藥材的組織培養方法，特別涉及大黃藤莖段組培快繁方法，所述方法選取大黃藤莖端作為外植體，在超凈臺內依次用酒精、漂白粉溶液及升汞溶液消毒；將消毒好的莖段，接種于以WPM為基本培養基，添加NAA、TDZ及活性炭的誘導培養基內；將誘導出的叢生芽，接種于以WPM為基本培養基，添加NAA、6?BA、KT、GA3以及活性炭的增殖培養基內；將誘導或增殖獲得叢生芽，接種于以WPM為基本培養基，添加NAA、IBA、多效唑以及活性炭的生根培養基內。該方法叢生芽誘導率、生根率及成活率高于已知的文獻。

技術領域

本發明涉及一種中藥材的組織培養方法，屬于植物組織培養及中藥材種植領域，特別涉及大黃藤的組織培養方法。

背景技術

大黃藤（Fibraurearecisa Pierre.），又名黃藤、天仙藤、黃連藤、藤黃連，為防己科天仙藤屬多年生木質大藤本，最初僅產區少數民族使用，用作黃色染料和治療瘡瘍，上世紀中草藥運動中，蒙自駐軍衛生隊和紅河州醫院發掘了黃藤的醫藥用途，經初步臨床驗證后在云南全省推廣應用，很快即被1977版《中國藥典》收錄，是較為典型的從傳統民族醫藥中開發現代植物藥的范例。

大黃藤以藤莖入藥，具清熱解毒，瀉火通便的功效，主要用于熱毒內盛，便秘，瀉痢，咽喉腫痛，目赤紅腫，癰腫瘡毒等癥。現代醫藥研究表明，大黃藤內含黃藤素、藥根堿、四氫巴馬汀等多個生物堿、黃藤內酯等內酯類化合物、齊墩果酸等萜類化合物以及棕櫚酸等揮發油，其中以黃藤素含量為最高，應用亦較為廣泛。黃藤素等生物堿具有抑菌活性、抗炎作用、抗病毒、增強免疫力、提高記憶力等藥理作用。目前以大黃藤藥材或其提取物黃藤素為原料藥的中藥制劑有11個，包括復方青蒿噴霧劑、復方青蒿搽劑、消腫止痛酊、礬藤痔注射液、黃藤素分散片、黃藤素注射液、黃藤素片、黃藤素膠囊、黃藤素軟膠囊、復方黃藤洗液、黃藤素栓，約45家制藥企業生產，其中黃藤素片以及黃藤素膠囊生產及市場應用最為廣泛。

大黃藤野生主要分布于云南東南部、廣西南部及廣西西南部，其中云南的紅河州、西雙版納州、普洱市和臨滄市分布較廣，主要生于海拔180~1000米的熱帶、亞熱帶叢林、山野溝谷中，越南、老撾、柬埔寨亦有分布。由于大黃藤分布區域較為狹窄，生長周期較長，使得野生資源蘊藏量較低，同時分布較為分散。同時，現代中藥制劑的不斷開發及藥效的認可性越來越高，大黃藤市場應用愈發廣泛，人工無序采挖，大量消耗了野生植物資源，使得蘊藏量本就較低的野生資源更加匱乏。1993年后，由于原料短缺，價格逐年上漲，采挖已經擴張至老撾、越南等周邊國家。2003年以來，云南紅河州開始嘗試了大黃藤的人工馴化種植，后云南臨滄市、德宏州、西雙版納州亦先后嘗試了大黃藤的人工馴化種植，已初步完成了大黃藤的種植技術、種植適應性等，同時已在紅河屏邊縣、臨滄雙江縣已初步形成一定規模，但目前的種植中種苗繁育技術均采用傳統的種子繁殖和扦插繁殖，具繁殖速度慢，繁殖周期長、繁殖率低的缺點。

對比文件《大黃藤莖尖快繁研究》公開了一種大黃藤的組培方法，以大黃藤莖尖為外植體,通過組織培養的方法使莖尖不經愈傷直接誘導分化成苗,該方法經若干對比實驗認為最佳培養基組合為MS+6-BA 0.5 mg/L+LAA 0.5 mg/L+ZT 0.1 mg/L,生根最佳培養基組合為1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。本發明旨在該文獻的基礎上，通過更新培養基配方探索得到實驗效果更佳的大黃藤組培方法。

發明內容

本發明針對以上所述的大黃藤現有的種苗繁育技術中存在繁殖周期長，繁殖速度慢，繁殖率低等缺點，利用現代生物技術，發明了一種組分簡單、操作簡便、生產周期短、繁殖率高，可為規模化種植在短期內大量提供充足、優質種苗的一種組織培養方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

1）外植體的選擇：選擇健壯的大黃藤植株，剪取無病蟲害、未木質化的莖端10~20cm作為外植體；