[發明專利]一種提高樟葉越桔組培苗中6′-O-咖啡酰熊果苷含量的方法

有效

• 申請號: 202010176530.7
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111183903B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 趙平;唐軍榮;劉云;闞歡;張德國;尚俊可;付羚
• 申請（專利權）人: 西南林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明合盛知識產權代理事務所(普通合伙) 53210
• 代理人: 龍燕

本發明公開一種提高樟葉越桔組培苗中6′?O?咖啡酰熊果苷含量的方法，屬于植物組織培養技術領域。選擇以下培養基對樟葉越桔組培苗進行繼代培養，所述培養基以WPM為基本培養基，添加ZT和NAA兩種不同植物生長調節劑，其中ZT添加濃度為0.1～5.0mg/L，NAA添加濃度為0.01～2.0mg/L，調節pH值為5.0～6.0。本方法簡單易行，可在較短時間內完成對樟葉越桔組培苗生長調控和次生代謝產物CA的生產調控及含量的測定。通過施加ZT和NAA兩種不同植物生長調節劑不同濃度配比進行調控，其組培苗葉片和莖段中CA含量分別提高為對照組WPM條件下的4～7倍和2～5倍，是獲取大量高含量CA樟葉越桔材料的有效途徑。

技術領域

本發明涉及一種提高樟葉越桔組培苗中6′-O-咖啡酰熊果苷含量的方法，屬于植物組織培養技術領域。

背景技術

樟葉越桔(Vaccinium dunalianum)為杜鵑花科(Ericaceae)越桔屬(Vaccinium)常綠灌木，主要分布于我國云南、四川、貴州、西藏、臺灣等地，錫金、不丹、印度、緬甸和越南亦有分布，在云南省境內則主要分布于云南西北部經滇中高原至滇南和滇東南。其花冠為淡綠帶紫紅色或淡紅色，寬鐘狀，漿果球形，直徑4～12mm，成熟時呈紫黑色，被白粉，花期4～5月，果期9～12月，果實營養豐富，具有較高的藥用和保健價值。樟葉越桔的幼嫩葉芽因形似雀嘴呈錐狀，在云南彝族民間又稱“雀嘴茶”，具有祛風除濕、舒筋活絡等功效，自明代起就作為一種茶代用品長期飲用至今。

申請人前期研究發現，樟葉越桔是一種富含咖啡酰熊果苷類物質的特色特殊資源植物，并從雀嘴茶中分離鑒定了熊果苷和10余種酰化熊果苷類衍生物，其中主要化學成分CA的得率高達22％，并對其制備方法進行了專利保護(趙平，張穎君，許敏，楊崇仁，2007.6′-O-咖啡酰基熊果甙的制備方法.授權專利號：ZL200710065956.X)。熊果苷是源于綠色植物的天然活性物質，也是目前國際公認的21世紀的理想皮膚美白祛斑活性劑。基于斑馬魚模型的研究發現，CA的黑色素生成抑制活性優于熊果苷，且毒性僅為熊果苷的1/2，表明樟葉越桔可望作為熊果苷的替代資源加以開發利用。目前，樟葉越桔仍處于野生狀態，由于其生長緩慢，且分布量有限，加之隨著近年來對雀嘴茶的關注度不斷提高，導致其連年遭受破壞性采摘，野生樟葉越桔數量急劇減少。因此，開展樟葉越桔的組織培養并利用組織培養系進行次生代謝產物含量的提高顯得非常有必要。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術存在的不足，基于CA在樟葉越桔植物體中的分布特點及其所具有的藥理活性，提供一種提高樟葉越桔組培苗中6′-O-咖啡酰熊果苷含量的方法，該方法具有繁殖速度快、周期短、CA含量高等優點，是獲取大量高含量CA樟葉越桔材料的有效途徑，具體過程為：選擇以下培養基進行繼代培養，所述培養基以WPM為基本培養基，添加ZT和NAA兩種不同植物生長調節劑，其中ZT添加濃度為0.1～5.0mg/L，NAA添加濃度為0.01～2.0mg/L，調節pH值為5.0～6.0。

優選的，本發明所述培養條件為：培養基于121～125℃，高壓滅菌21～25min；培養溫度為25±2℃，光照強度為30～50μmol/m²·s，每天光照12±2h，培養周期2±0.5個月。

本發明用于繼代培養的苗為：以野生樟葉越桔幼嫩帶芽莖段為外植體通過對初代啟動培養，繼代增殖培養后，選取生長健壯的組培瓶苗進行繼代培養。(參考文獻羅旭璐,唐軍榮,李娜,等.樟葉越桔的組織培養與快速繁殖[J].植物生理學報,2014,50(11):1717-1720.)

本發明所述培養基中的凝膠劑可以是瓊脂或卡拉膠，優選是瓊脂，強度為1300mg/cm³，瓊脂在培養基中終濃度為5～6g/L；所用的糖為食用白砂糖，所用的水為蒸餾水。

本發明所述培養基的pH值用1mol/L NaOH或HCl來調節。

本發明的有益效果：