[發明專利]Mbp基因過表達型小膠質細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010173815.5
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111321170A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 楊麗娟;周美玲;王姝蕾;王芳;肖繼坪;陳波;易子寒;華海蓉
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發明公開了一種Mbp基因過表達型小膠質細胞及其制備方法和應用，涉及基因工程技術領域。本發明公開的制備方法包括將Mbp基因插入過表達慢病毒載體中，得到重組慢病毒載體，然后將重組慢病毒載體與慢病毒包裝質粒共同轉染宿主細胞以制備Mbp基因過表達的重組慢病毒，重組慢病毒感染小膠質細胞以得到Mbp基因過表達型小膠質細胞。該制備方法可以制備出Mbp基因過表達型小膠質細胞，該小膠質細胞可以穩定和高效表達Mbp基因，Mbp基因能夠在小膠質細胞內發揮正常生物學作用，為研究MBP在小膠質細胞內的具體功能以及調控機制等提供可靠的細胞材料。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體而言，涉及Mbp基因過表達型小膠質細胞及其制備方法和應用。

背景技術

神經炎癥是指發生在中樞神經系統及周圍神經系統中的炎癥反應。大量的研究發現，多種中樞神經疾病的發生發展與神經炎癥密切相關，如阿爾茨海默病(Alzheimerdisease，AD)、帕金森病(PA20001809rkinson disease，PD)和腦梗死等。神經炎癥主要通過炎癥介質、炎性細胞因子及氧化應激產物的產生和釋放造成神經元變性壞死，從而引發腦損傷。神經炎癥相關疾病的不良預后嚴重影響了患者的生存生活質量，巨額治療費用給家庭和社會帶來沉重的負擔，有研究表明PD每年給我國帶來的經濟負擔大概170億元。而且其不良預后嚴重影響了患者和家庭的生存生活質量。所以深入研究神經炎癥的發生機制，有望為中樞神經系統疾病的預防和治療提供新的思路和理論依據。

激活的小膠質細胞在神經炎癥相關性疾病的發生發展過程中發揮重要作用。小膠質細胞由血液中的單核細胞演化而來。一般情況下，中樞神經系統內的小膠質細胞處于靜止狀態，病理狀態下，如中樞神經系統疾病、中風等會導致小膠質細胞的活化。活化的小膠質細胞通過分泌炎癥介質、共激活星形膠質細胞，引起大量自由基、一氧化氮、蛋白酶、炎癥細胞因子等釋放，致使中樞神經系統發生炎性損害和神經細胞死亡。此外，活化的小膠質細胞及其產生的細胞炎癥因子亦可破壞血腦屏障結構，易于外周血中T淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞等進入腦內，與星形膠質細胞等共同產生更多的炎癥介質，進而引起炎癥級聯反應，加重腦組織的損傷。

MBPs是髓鞘蛋白的重要構成成分,主要分布在中樞和周圍神經系統的髓鞘形成細胞(少突膠質細胞及施旺細胞)內。巨噬細胞中有MBPs表達，Ling EA等人的研究發現兩種MCs內均有Mbp基因表達。同時Filipovic R.研究小組發現激活小膠質細胞內MBPs表達增高。但是MBPs在小膠質細胞內的具體功能及調控機制目前仍不清楚且未見報道。而研究MBPs在小膠質細胞內的具體功能及調控機制又缺乏相應的細胞材料。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種Mbp基因過表達型小膠質細胞及其制備方法和應用。本發明提供的制備方法可以制備出Mbp基因過表達型小膠質細胞，該小膠質細胞可以穩定表達Mbp基因，該基因可在小膠質細胞內發揮正常生物學功能，本發明為研究MBP在小膠質細胞內的具體功能以及調控機制等提供可靠的細胞材料。

本發明是這樣實現的：

一方面，本發明提供制備Mbp基因過表達型小膠質細胞的方法，其包括如下步驟：

重組過表達慢病毒包裝步驟：將Mbp基因插入過表達慢病毒載體中，得到重組慢病毒載體，然后將所述重組慢病毒載體與慢病毒包裝質粒共同轉染宿主細胞以制備Mbp基因過表達的重組慢病毒；

其中，所述過表達慢病毒載體為LentiORF pLEX-MCS；

細胞侵染步驟：將所述Mbp過表達的重組慢病毒感染小膠質細胞以得到Mbp基因過表達型小膠質細胞。