[發(fā)明專利]Mbp基因過表達(dá)型小膠質(zhì)細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010173815.5
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111321170A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊麗娟;周美玲;王姝蕾;王芳;肖繼坪;陳波;易子寒;華海蓉
• 申請（專利權(quán)）人: 昆明醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

1.一種制備Mbp基因過表達(dá)型小膠質(zhì)細(xì)胞的方法，其特征在于，其包括如下步驟：

重組過表達(dá)慢病毒包裝步驟：將Mbp基因插入過表達(dá)慢病毒載體中，得到重組慢病毒載體，然后將所述重組慢病毒載體與慢病毒包裝質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞以制備Mbp基因過表達(dá)的重組慢病毒；

其中，所述過表達(dá)慢病毒載體為LentiORF pLEX-MCS；

細(xì)胞侵染步驟：將所述Mbp過表達(dá)的重組慢病毒感染小膠質(zhì)細(xì)胞以得到Mbp基因過表達(dá)型小膠質(zhì)細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述包裝質(zhì)粒包括pVSV-G、pRev和pRRE。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為293T細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述小膠質(zhì)細(xì)胞的種屬來源為哺乳動物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物選自小鼠、大鼠、豬、牛、馬和羊中的任意一種；

優(yōu)選地，所述哺乳動物為小鼠。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，Mbp基因所編碼的MBP蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

優(yōu)選地，Mbp基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7.一種Mbp基因過表達(dá)型小膠質(zhì)細(xì)胞，其特征在于，其由權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法制得。

8.權(quán)利要求7所述的Mbp基因過表達(dá)型小膠質(zhì)細(xì)胞在研究Mbp基因功能或其調(diào)控機制中，或者在篩選治療神經(jīng)炎癥藥物中的應(yīng)用。

9.一種用于制備Mbp基因過表達(dá)型小膠質(zhì)細(xì)胞的載體組合物，其特征在于，其包括包裝質(zhì)粒和插入有Mbp基因的重組慢病毒載體，所述包裝質(zhì)粒用于與所述重組慢病毒載體配合使用轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，以制備Mbp基因過表達(dá)的重組慢病毒；

所述重組慢病毒載體的骨架為LentiORF pLEX-MCS；

所述重組慢病毒用以轉(zhuǎn)染小膠質(zhì)細(xì)胞以得到Mbp基因過表達(dá)型小膠質(zhì)細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的載體組合物，其特征在于，所述包裝質(zhì)粒包括pVSV-G、pRev和pRRE；

優(yōu)選地，所述宿主細(xì)胞為293T細(xì)胞；

優(yōu)選地，所述小膠質(zhì)細(xì)胞的種屬來源為哺乳動物；

優(yōu)選地，所述哺乳動物選自小鼠、大鼠、豬、牛、馬和羊中的任意一種；

優(yōu)選地，所述哺乳動物為小鼠；

優(yōu)選地，Mbp基因所編碼的MBP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

優(yōu)選地，Mbp基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。