[發(fā)明專利]一種快速定量細(xì)胞外囊泡樣本濃縮方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010165128.9
• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111398008A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸路
• 申請（專利權(quán)）人: 易春;方國偉;陸路
• 主分類號: G01N1/40
• 分類號: G01N1/40
• 代理公司: 浙江千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發(fā)明涉及一種快速定量細(xì)胞外囊泡樣本濃縮方法，包括以下步驟：步驟1,篩板分隔濃縮容器內(nèi)空間為部分相通，且分別向外連通的兩部分，一端為上開口，一端為下開口；步驟2,自上開口向篩板一側(cè)加入待濃縮樣本，并充滿下開口一側(cè)空間；步驟3,自上開口向容器加入高吸水材料；步驟4,給予待濃縮樣本自上開口一側(cè)向下開口一側(cè)的持續(xù)的力，直至篩板吸水材料一側(cè)可流動液體吸收完畢；步驟5,收集排出的剩余液體；本發(fā)明的濃縮速度快，20毫升濃縮至1ml，僅需3?5分鐘，充分利用了超吸水材料的快速吸水能力至濃縮過程；過量超吸水材料可以加速吸水能力，由于超吸水材料價格低，超量造成的使用成本上漲有限。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于建筑技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速定量細(xì)胞外囊泡樣本濃縮方法。

背景技術(shù)

生物大分子在制備過程中，為了保存和鑒定的目的，往往需要進行濃縮。

常用的濃縮方法的：

1、減壓加溫蒸發(fā)濃縮：

通過降低液面壓力使液體沸點降低，減壓的真空度愈高，液體沸點降得愈低，蒸發(fā)愈快，此法適用于一些不耐熱的生物大分子的濃縮。

缺點：不適用于不耐熱細(xì)胞外囊泡。

2、空氣流動蒸發(fā)濃縮：

空氣的流動可使液體加速蒸發(fā),鋪成薄層的溶液，表面不斷通過空氣流；或?qū)⑸锎蠓肿尤芤貉b入透析袋內(nèi)置于冷室，用電扇對準(zhǔn)吹風(fēng)，使透過膜外的溶劑不沁蒸發(fā)，而達到濃縮目的。

缺點：此法濃縮速度慢，不適于大量溶液的濃縮。

3、冰凍法：

生物大分子在低溫結(jié)成冰，鹽類及生物大分子不進入冰內(nèi)而留在液相中，操作時先將待濃縮的溶液冷卻使之變成固體，然后緩慢地融解，利用溶劑與溶質(zhì)融點介點的差別而達到除去大部分溶劑的目的。如蛋白質(zhì)和酶的鹽溶液用此法濃縮時，不含蛋白質(zhì)和酶的純冰結(jié)晶浮于液面，蛋白質(zhì)和酶則集中于下層溶液中，移去上層冰塊，可得蛋白質(zhì)和酶的濃縮液。

缺點：濃縮物濃度受低共熔濃度和冰晶可分離程度的制約，成本高。

4、吸收法：

通過吸收劑直接收除去溶液中溶液分子使之濃縮。所用的吸收劑必需與溶液不起化學(xué)反應(yīng)，對生物大分子不吸附，易與溶液分開。常用的吸收劑有聚乙二醇，聚乙稀吡咯酮、蔗糖和凝膠等，使用聚乙二醇吸收劑時，先將生物大分子溶液裝入半透膜的袋里，外加聚乙二醇復(fù)蓋置于4度下，袋內(nèi)溶劑滲出即被聚乙二醇迅速吸去，聚乙二醇被水飽和后要更換新的直至達到所需要的體積。

缺點：使用超濾膜或者透析膜包裹待濃縮，濃縮速度慢，濃縮量不易控制。

5、超濾法：

超濾法是使用一種特別的薄膜對溶液中各種溶質(zhì)分子進行選擇性過濾的方法，不液體在一定壓力下(氮氣壓或真空泵壓)通過膜時，溶劑和小分子透過，大分子受阻保留，這是近年來發(fā)展起來的新方法，最適于生物大分子尤其是蛋白質(zhì)和酶的濃縮或脫鹽，并具有成本低，操作方便，條件溫和，能較好地保持生物大分子的活性，回收率高等優(yōu)點。應(yīng)用超濾法關(guān)鍵在于膜的選擇，不同類型和規(guī)格的膜，水的流速，分子量截止值(即大體上能被膜保留分子最小分子量值)等參數(shù)均不同，必須根據(jù)工作需要來選用。另外，超濾裝置形式，溶質(zhì)成份及性質(zhì)、溶液濃度等都對超濾效果的一定影響。

缺點：使用成本高，生產(chǎn)技術(shù)由國外公司壟斷。

現(xiàn)有吸收濃縮法，相較于其他濃縮辦法超濾材料成本低廉，一種辦法是將超吸水材料直接投入待濃縮樣本中；其缺點是：1)濃縮終點不易控制，2)難于濃縮至固定體積；3)超量超吸水材料投放會導(dǎo)致過度濃縮而損失樣本，4)濃縮后吸水材料與濃縮液不易分離；5)對于含有鹽的溶液濃縮速度慢；