[發明專利]用于檢測花生黑腐病菌的LAMP檢測引物及其檢測方法

有效

• 申請號: 202010146746.9
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111088392B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 丁雪玲;黃建成;謝世勇;季潔;曾兆華
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

1.用于檢測花生黑腐病菌的LAMP檢測引物，其特征在于：所述LAMP檢測引物，包括一對外引物和一對內引物；

外側引物：

TF3：TGACACTGTGCTGACTCTCA，

TB3：GCTGAAGGACAGAAGCTGAG；

內側引物：

TFIP：GCTTGTCAAGAACCCAGGCGT-AAACAGGAAGCCGCTGAAC，

TBIP：CCGAGCGTGAGCGTGGTATC-GACGGTGACATCGTACTTGG。

2.利用權利要求1所述的LAMP檢測引物用于檢測花生黑腐病菌的方法，其特征在于：利用所述LAMP檢測引物進行擴增，LAMP反應體系為25μl，包括5μM外側引物TF3和TB3各0.25μl，40μM內側引物TFIP和TBIP各0.25μl，反應混合液18.0μl，8UBst DNA 聚合酶1μl，DNA模板25ng，用滅菌超純水補足至25 μl；LAMP反應條件為60-63℃溫育60 min，82℃保溫5min；所述的反應混合液中各組分的濃度為40mM Tris-HCl，20mM (NH₄)₂SO₄，20mM KCl，16mMMgSO₄，0.2% Triton X-100，1.6M Betaine，2.8 mM dNTPs；

在LAMP反應的擴增產物中加入顯色劑SYBR green ? 1μl，顯色結果觀察到綠色熒光判斷為陽性，橙色判斷為陰性；取2μl擴增產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，出現梯形條帶判斷為陽性，沒有出現則判斷為陰性。