[發明專利]編碼雞血藤花青素還原酶的基因及其應用

有效

• 申請號: 202010144942.2
• 申請日: 2020-03-04
• 公開（公告）號: CN111235167B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發明（設計）人: 秦雙雙;歐春麗;喬柱;梁瑩;繆劍華
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;C12N15/11;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 鄧雪明

本發明公開了一種編碼雞血藤花青素還原酶的基因及其應用，填補了我國傳統中藥材雞血藤中分離克隆花青素還原酶基因的空白。本發明所提供的花青素還原酶基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個或多個核苷酸的同源序列或其等位基因及其衍生的核苷酸序列。所述基因編碼的蛋白質具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸的同源序列。該基因在雞血藤根、莖、葉、花以及果實中均有表達，其中在根和莖中表達量較高，在葉中含量很低。本發明提供的花青素還原酶有助于利用基因工程技術提高雞血藤中活性成分表兒茶素的含量，對今后雞血藤種質資源改良具有很好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，涉及雞血藤活性成分表兒茶素生物合成途徑中的關鍵酶及其編碼基因，更具體地說，本發明涉及編碼雞血藤花青素還原酶的基因及其應用。

背景技術

雞血藤來源于豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤莖，具有補血活血，調經止痛，舒筋活絡的功效。用于治療月經不調，痛經，經閉，風濕痹痛，麻木癱瘓，血虛萎黃等病癥，廣泛用于婦科、風濕痹痛等中成藥中。研究結果表明，雞血藤主要活性成分為黃酮類化合物，其中表兒茶素是主要活性成分之一。

表兒茶素合成途徑中，花青素還原酶(Anthocyanidin reductase,ANR)催化花青素轉變為表兒茶素。然而，目前尚未對雞血藤ANR基因進行克隆，也未發現其作為提高植物表兒茶素含量的應用的研究和報道。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述缺陷，并提供至少后面將說明的優點。

本發明的另一個目的是通過基因克隆，獲得雞血藤花青素還原酶(簡稱SsANR)基因的gDNA序列、cDNA序列及氨基酸序列，為后續利用生物技術手段提高雞血藤有效部位表兒茶素的含量提供重要基礎。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，本發明提供編碼雞血藤花青素還原酶的gDNA，其中，為下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.1所示的序列；

2)能編碼SEQ ID No.1經添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸且具有雞血藤花青素還原酶活性蛋白質的核苷酸序列。

編碼雞血藤花青素還原酶的cDNA，其中，為下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.2所示的序列；

2)在嚴格條件下與SEQ ID No.2的cDNA序列雜交且編碼具有雞血藤花青素還原酶活性蛋白質的DNA分子；

3)編碼SEQ ID No.3所示氨基酸序列的核苷酸序列；

4)編碼SEQ ID No.3經添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸且具有雞血藤花青素還原酶活性蛋白質的核苷酸序列。

具有雞血藤花青素還原酶活性的蛋白質，其中，為下列氨基酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；

2)SEQ ID No.3經添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸且具有雞血藤花青素還原酶活性的氨基酸序列。

一種用于擴增gDNA的引物，其中，所述引物的序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示。

一種用于擴增cDNA的引物，其中，所述引物的序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示。

一種gDNA或cDNA或蛋白質或引物作為提高植物表兒茶素含量的應用。

具體來說，能夠極大程度提高植物的根和莖中表兒茶素的含量。