[發(fā)明專利]基于海藻酸鈉-鉑納米粒子氧化酶活性的原花青素檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010141065.3
• 申請日: 2020-03-04
• 公開（公告）號: CN113358592B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳偉;何少斌;鄧豪華;楊柳;林秀玲
• 申請（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發(fā)明公開一種基于海藻酸鈉?鉑納米粒子氧化酶活性的原花青素檢測方法。本發(fā)明是基于海藻酸鈉?鉑納米粒子的氧化酶活性而建立的一種快速測定原花青素的紫外可視化分析方法。在最優(yōu)顯色條件下，檢測線性范圍為4~32.5μmol/L，最低檢測限為2.0μmol/L，檢測的靈敏度高；相關(guān)系數(shù)為0.999，檢測的線性好；相對標準偏差RSD為0.6%，檢測結(jié)果的精密度高。此外，本發(fā)明所使用的鉑納米粒子制備簡便，底物TMB便宜易得，可操作性強。同時，本發(fā)明還具有穩(wěn)定性高，重現(xiàn)性好，特異性強等優(yōu)點，為原花青素的測定開辟了一條新的途徑，并有望在黃酮類物質(zhì)的篩選鑒定、研究分析等領(lǐng)域得到應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供一種簡單易行的比色分析方法用于原花青素檢測，基于海藻酸鈉-鉑納米粒子的氧化酶活性所建立的一種快速測定原花青素的紫外可見分析方法，屬于分析化學(xué)和納米技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

原花青素又名縮合鞣質(zhì)，是廣泛存在于葡萄、黑加侖、桑葚、藍莓、松樹皮、銀杏等多種植物中的一大類多酚類化合物的總稱。除植物外，一些日常飲用品如蘋果汁、紅葡萄酒中，也存在許多食源性的原花青素可被人們所攝取，其低聚物—低聚原花青素，是目前國際上公認的清除人體內(nèi)自由基有效的天然抗氧化劑。原花青素具有很強的生物活性，在一些疾病的防治和美容養(yǎng)顏方面有著獨特的功效。不僅如此，原花青素還具有降血脂、降血壓、抗癌、抗輻射等功能。因此，原花青素有望在臨床治療、食品保健、護膚美顏等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

然而，由于原花青素的組成和結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，在國際上仍未形成統(tǒng)一的關(guān)于原花青素含量的測定方法。目前，對于原花青素的定量分析方法主要有分光光度法和高效液相色譜法，具體包括：硫酸-香草醛法、鉬酸銨法、正丁醇-鹽酸-HPLC法和硫解-HPLC法。這些方法的分析目的不同，定量分析原理不同，使用的對照品通常也不盡相同，而根據(jù)以往的文獻，也未見有針對不同方法而進行較系統(tǒng)的評價和比較。并且這些方法檢測過程比較復(fù)雜耗時，技術(shù)要求高，所需儀器昂貴，不能廣泛應(yīng)用于原花青素產(chǎn)品的測定。因此，建立一種簡易高效的檢測分析方法用于評估原花青素的抗氧化能力，有利于醫(yī)藥質(zhì)量控制和顧客的消費指導(dǎo)，具有重要意義。

本發(fā)明采用具有良好氧化酶活性的海藻酸鈉-鉑納米粒子。由于海藻酸鈉-鉑納米粒子對底物3,?3’,?5,?5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽（TMB）具有高效的氧化酶活性，可迅速催化TMB氧化顯藍色，同時，基于原花青素的抗氧化能力，能抑制TMB的氧化進而抑制顯色反應(yīng)的進行，因此，構(gòu)建了一種測定原花青素的比色檢測法。本發(fā)明具有穩(wěn)定性好，靈敏度高，重現(xiàn)性好，成本低等優(yōu)點，為原花青素實際樣品的測定開辟了一條新的途徑，并有望進一步在黃酮類物質(zhì)的篩選研究領(lǐng)域得到應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是基于海藻酸鈉-鉑納米粒子良好的氧化酶活性，針對原花青素的抗氧化能力，構(gòu)建了一種原花青素抑制海藻酸鈉-鉑納米粒子對3,?3’,?5,?5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽（TMB）進行氧化的顯色體系。隨著原花青素含量的增加，顯色體系在最大紫外吸收波長450?nm處的吸光度不斷下降。繼而根據(jù)顯色體系在波長450?nm處的吸光度差值ΔA₄₅₀（ΔA_450?=?A_0?-?A_t，其中A₀和A_t分別是不含原花青素和存在相應(yīng)濃度原花青素時，反應(yīng)產(chǎn)物在450?nm處的吸光度）對原花青素終濃度以10為底的對數(shù)值繪制標準工作曲線，于是，便可對原花青素實際樣品進行定量檢測。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種基于海藻酸鈉-鉑納米粒子氧化酶活性的原花青素檢測方法，其特征是利用生物相容性好且無毒的海藻酸鈉作為納米材料的保護劑來制備海藻酸鈉-鉑納米粒子，所合成的材料在溫和條件下就能快速催化溶解氧產(chǎn)生O₂^??并氧化3,?3’,?5,?5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽（TMB）產(chǎn)生顏色反應(yīng)，并利用其良好的內(nèi)在模擬氧化物酶活性對原花青素進行檢測。