[發明專利]一種提高替考拉寧發酵產量的補料方法

有效

• 申請號: 202010136204.3
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111303248B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 周兵兵;暨火興;傅貞博;巫秋萍
• 申請（專利權）人: 麗珠集團福州福興醫藥有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C12P21/02;C12N1/20;C12R1/045
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 顏麗蓉

本發明公開了一種提高替考拉寧發酵產量的補料方法，屬于生物發酵技術領域，替考拉寧的發酵方式為補料分批發酵，補料方式為流加補料，流加物質為乙酸鈉溶液，流加補料的時間為補料分批發酵的第一次對數生長期至發酵終止，流加補料過程中流加速率逐步下降。本發明提供的補料方法通過在替考拉寧發酵的第一次對數生長期至發酵終止階段控制流加速率進行乙酸鈉溶液的流加，顯著提高了替考拉寧的發酵產量，可達4.8g/L，同時流加乙酸鈉溶液相較于流加碳源不會引起的反饋抑制效應的發生，也不會出現發酵單位后勁不足和發酵后期料液起泡逃液問題；該補料方法成本低，工藝簡單易于推廣且易于在大規模生產上使用。

技術領域

本發明屬于生物發酵技術領域，具體涉及一種提高替考拉寧發酵產量的補料方法。

背景技術

替考拉寧又稱肽可霉素，是由游動放線菌(Actinoplanesteichomyceticus)通過生物發酵法產生的一種新的糖肽類抗生素，是繼萬古霉素后又一治療重癥革蘭氏陽性菌感染，是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)感染的最有效武器。

替考拉寧的相對分子質量約為1900，其由7個分子的氨基酸和3個分子的糖基及酰基脂肪酸側鏈組成。主要活性成分為TA2，由5個化學結構十分相似的化合物(TA2-1，TA2-2，TA2-3，TA2-4和TA2-5)組成，而5個組分的差異僅表現在脂肪酸鏈的不同(參考圖1)。其框架結構為由6個肽鍵將7個氨基酸連接而成，其中1、2、4,、5和6這5個氨基酸由酪氨酸衍生而成，3和7這2個氨基酸以乙酸鹽為生物合成前體。

在我國，替考拉寧雖已實現產業化，但發酵產量較低，為2.0-3.5g/L。雖然現有技術如申請號為201410729473.5的中國發明專利，通過在發酵過程中向發酵培養基中添加所述補料培養基，降低抑制產生替考拉寧次生代謝途徑的因素，可提高替考拉寧發酵的產量，但這種方法成本較高，且容易出現發酵后期料液起泡逃液、流加葡萄糖等碳源引起的反饋抑制效應的問題。

發明內容

為了克服上述現有技術的缺陷，本發明所要解決的技術問題是：提供一種成本低且工藝簡單的可提高替考拉寧發酵產量的補料方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種提高替考拉寧發酵產量的補料方法，替考拉寧的發酵方式為補料分批發酵，所述補料分批發酵的補料方式為流加補料，流加物質為乙酸鈉溶液，所述流加補料的時間為補料分批發酵的第一次對數生長期至發酵終止，流加補料過程中流加速率逐步下降。

本發明的有益效果在于：組成替考分子的框架結構中有兩個氨基酸是以乙酸鹽為生物合成前體的，本發明使用的補料物質是15％乙酸鈉溶液，作為小分子其易被生物體吸收利用；在生物體內乙酸鈉僅通過乙酰輔酶A合成途徑即可活化生成乙酰輔酶A進入代謝流中，相較其他糖類物質省去了中間分解代謝環節；乙酰輔酶A是能源物質代謝的重要中間代謝產物，在體內能源物質代謝中是一個樞紐型物質，通過補加適量乙酸鈉提高了生物體內乙酸輔酶A的含量，間接促進生物體內能源物質代謝；另外發明人在長期實際生產中研究總結發現到游動放線菌(Actinoplanesteichomyceticus)在微堿性條件下，替考拉寧的合成量較大，而15％乙酸鈉pH約11.5左右，起到外源性堿的作用。本發明提供的補料方法，通過在替考拉寧發酵的第一次對數生長期至發酵終止階段控制流加速率進行乙酸鈉溶液的流加，顯著提高了替考拉寧的發酵產量，可達4.8g/L，同時流加乙酸鈉溶液相較于流加碳源不會引起的反饋抑制效應的發生，也不會出現發酵單位后勁不足和發酵后期料液起泡逃液問題；該補料方法成本低，工藝簡單易于推廣，且易于在大規模生產上使用。

附圖說明

圖1所示為替考拉寧的結構式。

具體實施方式

為詳細說明本發明的技術內容、所實現目的及效果，以下結合實施方式并配合附圖予以說明。

本發明最關鍵的構思在于：替考拉寧在發酵過程中依照一定的速率流加乙酸鈉溶液。