[發(fā)明專利]斑石鯛虹彩病毒主要衣殼蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010130275.2
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111320676A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏京廣;秦啟偉;黃友華;黃曉紅;周勝
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K14/01
• 分類號: C07K14/01;C12N15/70;C07K16/08;G01N33/569
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發(fā)明公開了斑石鯛虹彩病毒主要衣殼蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備和應(yīng)用。本發(fā)明構(gòu)建得到了一種含斑石鯛虹彩病毒MCP基因的原核表達(dá)載體，由斑石鯛虹彩病毒MCP基因插入表達(dá)載體獲得；所述MCP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。該原核表達(dá)載體能夠表達(dá)斑石鯛虹彩病毒MCP重組蛋白，分子量約為54KD，與預(yù)期大小一致，主要以包涵體的形式存在；利用該重組蛋白免疫小鼠后，得到了斑石鯛虹彩病毒MCP多克隆抗體，該多克隆抗體能夠特異性地識別斑石鯛虹彩病毒，且該多克隆抗體的制備方法簡單，在檢測斑石鯛虹彩病毒中具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及斑石鯛虹彩病毒主要衣殼蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

斑石鯛(Oplegnathus punctatus)隸屬于鱸形目、石鯛科、石鯛屬，俗稱斑鯛，黑金鼓，廣泛分布于中國黃海、東海、南海以及朝鮮半島、日本列島和中國臺灣島等周邊海域，屬溫?zé)釒Ы吨邢聦郁~類，常棲息于巖礁和珊瑚中。在自然海域中該魚的自然資源稀少，常以垂釣獲得，極少形成自然群體，沒有明顯的盛魚期且產(chǎn)量很小。斑石鯛是我國名貴海水養(yǎng)殖魚類新品種之一，養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益很高，具有形態(tài)優(yōu)美、肉質(zhì)細(xì)膩、生長速度快、當(dāng)年即可上市等優(yōu)點(diǎn)。近年來，由于養(yǎng)殖規(guī)模的不斷增加，斑石鯛病害越來越厲害，斑石鯛虹彩病毒(Spotted Knifejaw Iridovirus，SKIV)就是其中最嚴(yán)重的病原之一。

虹彩病毒主要感染無脊椎動物和低等脊椎動物，屬大型二十面體狀、細(xì)胞質(zhì)型DNA病毒。虹彩病毒的主要衣殼蛋白(MCP)不僅是病毒的抗原相關(guān)蛋白，并且在病毒的包裝和感染過程中發(fā)揮重要作用。虹彩病毒科(Iridoviridae)共分為5個(gè)病毒屬，即虹彩病毒屬(Iridovirus)、綠虹彩病毒屬(Chloriridovirus)、淋巴囊腫病毒屬(Lymphocystivirus)、蛙病毒屬(Ranavirus)和腫大細(xì)胞病毒屬(Megalocytivirus)。近年來，腫大細(xì)胞病毒屬病毒引起的細(xì)胞腫大虹彩病毒病已成為魚類最主要的病毒病之一，該屬病毒可感染多種海水養(yǎng)殖魚類，如斑石鯛、真鯛(pagrosomus major)、大黃魚(Larimichthys crocea)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)、條石鯛(Oplegnathus fasciatus)、褐籃子魚(Siganusfuscescens)、眼斑擬石首魚(Sciaenop socellatus)、尖吻鱸(Lates calcarifer)等，也可感染羅非魚(Oreochromis niloticus)、翹嘴鱖(Siniperca chuatsi)、斑鱖(Sinipercascherzeri)、斑馬魚(Danio rerio)等淡水養(yǎng)殖魚類，危害巨大。斑石鯛虹彩病毒隸屬于腫大細(xì)胞病毒屬，可導(dǎo)致斑石鯛等海水養(yǎng)殖魚類發(fā)病并大量死亡，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，需要提供能夠有效檢測斑石鯛虹彩病毒的方法。

目前，市面上已有斑石鯛虹彩病毒PCR檢測試劑盒，但試劑盒是建立在PCR檢測原理基礎(chǔ)之上的，具有易污染、結(jié)果假陽性率較高，儀器設(shè)備較為昂貴，用時(shí)較長，現(xiàn)場使用不便利。因此，提供成本低、簡便、快速、檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高的斑石鯛虹彩病毒的檢測方法，對于監(jiān)測并有效控制斑石鯛虹彩病毒對海水養(yǎng)殖魚類的危害具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有斑石鯛虹彩病毒檢測方法的缺陷和不足，提供斑石鯛虹彩病毒主要衣殼蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備和應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是提供一種含斑石鯛虹彩病毒MCP基因的原核表達(dá)載體。

本發(fā)明另一目的是提供一種斑石鯛虹彩病毒MCP重組蛋白。

本發(fā)明又一目的是提供所述原核表達(dá)載體或所述重組蛋白在制備斑石鯛虹彩病毒MCP多克隆抗體中的應(yīng)用。

本發(fā)明再一目的是提供一種制備斑石鯛虹彩病毒MCP多克隆抗體的方法。

本發(fā)明再一目的是提供所述方法制備得到的多克隆抗體。