[發(fā)明專利]一種牡丹的組織培養(yǎng)繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010129492.X
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111165356B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 閆曉芳;屈武斐
• 申請（專利權(quán)）人: 上海培林生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發(fā)明屬于生物學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，揭示了一種牡丹的組織培養(yǎng)繁殖方法。所述方法主要包括：初代培養(yǎng)、擴繁增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、馴化移栽的步驟。本發(fā)明的方法能保持牡丹優(yōu)良品種的母本遺傳性狀，繁殖系數(shù)高，短期內(nèi)可獲得大量健壯組培苗，根系發(fā)達，移栽成活率高。本發(fā)明提供了一條能有效地滿足大規(guī)模工廠化育苗要求的快繁途徑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種牡丹的組織培養(yǎng)繁殖方法。

背景技術(shù)

牡丹(Paeonia suffruticosa)屬芍藥科(Paeoniaceae)芍藥屬(Paeonia)木本植物，是原產(chǎn)于我國的傳統(tǒng)名花，被尊為“國色天香”“花中之王”。牡丹是重要的藥用植物，還是重要的木本油料作物。

牡丹傳統(tǒng)的繁殖方式有有性繁殖中的種子繁殖，無性繁殖中的分株繁殖、壓條繁殖和嫁接繁殖等。由于多種牡丹結(jié)實率低甚至不結(jié)實，且種子發(fā)育不良，運用種子繁殖難以獲得優(yōu)良植株，實生苗不易保持母本的優(yōu)良性狀；嫁接和分株等常規(guī)無性繁殖方式受生長季節(jié)的限制，繁殖率低，形不成規(guī)模，無法滿足市場的需求，其繁殖速度限制了牡丹苗木的產(chǎn)業(yè)化和商品化生產(chǎn)。利用組培技術(shù)繁殖牡丹，是提高牡丹繁殖率的有效途徑，便于大規(guī)模生產(chǎn)。

目前國內(nèi)外牡丹的組織培養(yǎng)還沒有形成一個比較完善的技術(shù)體系，所以還一直未能用于生產(chǎn)實踐。主要問題(1)組培擴繁增殖系數(shù)低；(2)生根率低，生根質(zhì)量差，影響移栽；(3)移栽成活率低，移栽馴化階段死亡率高。牡丹生根移栽后成活率極低限制了組培技術(shù)在實際中的應(yīng)用，這是實現(xiàn)牡丹工廠化育苗的瓶頸。國內(nèi)關(guān)于牡丹試管苗的報道甚多，但還沒有真正應(yīng)用于生產(chǎn)。圖15是2019年中國北京世界園藝博覽會上參賽的部分牡丹生根苗的照片，根少且苗生長弱，褐化嚴重。圖16是2019年中國北京世界園藝博覽會上參賽的牡丹繁殖苗的照片，擴繁增殖比率低，且生長弱，植株瘦小，葉片少，葉色淺。

因此，解決生根和馴化移栽這兩個步驟，將是實現(xiàn)牡丹產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)很重要的突破。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能高效繁殖牡丹的組織培養(yǎng)繁殖方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種誘導(dǎo)牡丹生根的方法，所述方法包括：(1)獲取牡丹外植體的帶芽莖段，以啟動培養(yǎng)基培養(yǎng)，誘導(dǎo)獲得不定芽；所述啟動培養(yǎng)基包括：6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、PVPP和硝酸銀；(2)將(1)誘導(dǎo)的不定芽接種到擴繁培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽；所述擴繁培養(yǎng)基包括：6-芐基腺嘌呤、吲哚-3丁酸、惡霉靈、赤霉素、PVPP、抗壞血酸；(3)將(2)獲得的叢生芽接種到壯苗培養(yǎng)基中，獲得健壯芽苗；其中，所述壯苗培養(yǎng)基包括：6-芐基腺嘌呤、萘乙酸和抗壞血酸；(4)從(3)的芽叢中切割單芽，以生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，獲得生根的試管苗；其中，所述生根培養(yǎng)基包括：吲哚-3-丁酸、萘乙酸和活性炭。

在本發(fā)明的第二方面，提供一種牡丹組培苗的移栽馴化方法，所述方法包括：(a)以前述第一方面的方法誘導(dǎo)，獲得生根的牡丹試管苗；(b)將(a)的生根的試管苗移栽到育苗基質(zhì)中進行煉苗；(c)將(b)的煉苗后的苗移栽至自然環(huán)境中。

在一個優(yōu)選例中，步驟(1)中，以啟動培養(yǎng)基培養(yǎng)時，先暗培養(yǎng)3-4天，之后進行光培養(yǎng)。

在另一優(yōu)選例中，步驟(1)中，啟動培養(yǎng)基培養(yǎng)的時間為15-20天。

在另一優(yōu)選例中，步驟(1)中，所述啟動培養(yǎng)基包括：6-芐基腺嘌呤0.5-1.0毫克/升；萘乙酸0.20-0.50毫克/升；赤霉素0.6-1.0毫克/升；PVPP 200-500毫克/升；硝酸銀0.5-1.0毫克/升。

在另一優(yōu)選例中，步驟(2)中，所述的擴繁培養(yǎng)基包括：6-芐基腺嘌呤0.50-1.50毫克/升；吲哚-3丁酸0.10-0.30毫克/升；惡霉靈5.0-7.0毫克/升；赤霉素0.6-1.0毫克/升；PVPP 200-500毫克/升；抗壞血酸40-60毫克/升。