[發明專利]一種牡丹的組織培養繁殖方法

有效

• 申請號: 202010129492.X
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111165356B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 閆曉芳;屈武斐
• 申請（專利權）人: 上海培林生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種誘導牡丹生根的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1) 獲取牡丹外植體的帶芽莖段，以啟動培養基培養，誘導獲得不定芽；所述啟動培養基包括：1/2 MS培養基；6-芐基腺嘌呤0.5-1.0毫克/升；萘乙酸0.20-0.50毫克/升；赤霉素0.6-1.0毫克/升；PVPP 200-500毫克/升；硝酸銀0.5-1.0毫克/升；400-600毫克/升氯化鈣；

(2) 將(1)誘導的不定芽接種到擴繁培養基中培養，誘導產生叢生芽；所述擴繁培養基包括：MS培養基；6-芐基腺嘌呤0.50-1.50毫克/升；吲哚-3丁酸 0.10-0.30毫克/升；惡霉靈5.0-7.0毫克/升；赤霉素0.6-1.0毫克/升；PVPP 200-500毫克/升；抗壞血酸40-60毫克/升；400-600毫克/升氯化鈣；

(3) 將(2)獲得的叢生芽接種到壯苗培養基中，獲得健壯芽苗；其中，所述壯苗培養基包括：MS培養基；6-芐基腺嘌呤0.50-1.50毫克/升；萘乙酸0.10-0.30毫克/升；抗壞血酸40-60毫克/升；400-600毫克/升氯化鈣；

(4) 從(3)的芽叢中切割單芽，以生根培養基培養，獲得生根的試管苗；其中，所述生根培養基包括：1/2 MS培養基；吲哚-3丁酸1.0-3.0毫克/升；萘乙酸0.5-2.0毫克/升；活性炭1.0-2.0克/升；400-600毫克/升氯化鈣。

2.一種牡丹組培苗的移栽馴化方法，其特征在于，所述方法包括：

(a) 以權利要求1的方法誘導，獲得生根的牡丹試管苗；

(b) 將(a)的生根的試管苗移栽到育苗基質中進行煉苗；

(c) 將(b)的煉苗后的苗移栽至自然環境中。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，以啟動培養基培養時，先暗培養3-4天，之后進行光培養；或

啟動培養基培養的時間為15-20天。

4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，擴繁培養基培養的時間為25-35天。

5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，以壯苗培養基培養的時間為20-30天。

6.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，以生根培養基培養時，黑暗培養4-6天后，進行光培養生根培養基培養的時間為30-40天。

7.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(b)中，所述的育苗基質包括泥炭土、珍珠巖、蛭石或其組合。

8.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(b)中，煉苗前進行過渡培養，溫度20-22℃，相對濕度80-90%。

9.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(b)中，煉苗時的相對濕度為80%以下。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養基中還包括蔗糖和瓊脂。

11.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)之前，還包括對牡丹外植體進行消毒。

12.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，采用2-3次的次氯酸鈉溶液消毒。

13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，將外植體先以洗潔精溶液漂洗，再用酒精溶液消毒，之后以0.5%次氯酸鈉消毒2-3次。