[發(fā)明專利]一種花型氧化硅納米顆粒疫苗及其制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010116080.2 | 申請(qǐng)日： | 2020-02-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111388663A | 公開（公告）日： | 2020-07-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 高靜;董瑩;姜艷軍;王曉莉;張闖年 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 河北工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A61K39/385 | 分類號(hào)： | A61K39/385;A61K9/50;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 寧波高新區(qū)核心力專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33273 | 代理人： | 涂蕭愷 |
| 地址： | 300401 *** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 種花 氧化 納米 顆粒 疫苗 及其 制備 方法 | ||
本發(fā)明涉及一種花型氧化硅納米顆粒疫苗及其制備方法，包括如下步驟：步驟1、制備花型氧化硅納米顆粒；步驟2、所述花型氧化硅納米顆粒氨基化；步驟3、戊二醛活化氨基化了的花型氧化硅納米顆粒；步驟4、制備載有抗原的花型氧化硅納米顆粒；步驟5、加入佐劑溶液使得載有抗原的花型氧化硅納米顆粒吸附佐劑，得到同時(shí)載有抗原和佐劑的花型氧化硅納米顆粒。本發(fā)明合成具有連同孔道結(jié)構(gòu)的花型氧化硅納米顆粒，將抗原共價(jià)連接于氧化硅孔道表面，同時(shí)花型氧化硅吸附上佐劑形成納米疫苗。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥及納微材料制備領(lǐng)域，尤其是涉及一種花型氧化硅納米顆粒疫苗及其制備方法。
背景技術(shù)
目前，常見的腫瘤抗原多為蛋白質(zhì)、多肽和DNA等，在使用過程中安全可靠，但其單獨(dú)使用時(shí)免疫原性較弱，且易被酶降解。通常需要連同佐劑（CpG、R848、PolyI:C）使用或者借助其他手段保護(hù)疫苗并刺激免疫應(yīng)答。商售預(yù)防型疫苗常用佐劑為鋁佐劑，大量研究結(jié)果表明鋁佐劑對(duì)腫瘤抗原無效。因此，急需開發(fā)新型的疫苗載體同時(shí)實(shí)現(xiàn)佐劑和腫瘤抗原的共負(fù)載。
腫瘤疫苗的研究存在的問題是在于難于激發(fā)細(xì)胞免疫，引發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)首先需要外源性抗原發(fā)生溶酶體逃逸至胞質(zhì)中，并與MHC I作用表達(dá)于樹突狀細(xì)胞表面。氧化硅具有制備簡(jiǎn)便，粒徑均一可控，孔徑可調(diào)，生物安全性好等優(yōu)點(diǎn)，因而廣泛應(yīng)用于藥物遞送領(lǐng)域。盡管已有使用氧化硅作為疫苗載體的文獻(xiàn)報(bào)道，但其氧化硅納米顆粒不具有連同的孔道結(jié)構(gòu)，且抗原都是通過靜電吸附的方式進(jìn)行負(fù)載的。所以抗原負(fù)載量低，且容易受外界條件（溫度、離子濃度、pH等）的影響而從氧化硅上脫落，進(jìn)而影響疫苗的穩(wěn)定性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種花型氧化硅納米顆粒疫苗及其制備方法，其解決的技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中氧化硅納米顆粒不具有連同的孔道結(jié)構(gòu)，且抗原都是通過靜電吸附的方式進(jìn)行負(fù)載的。所以抗原負(fù)載量低，且容易受外界條件（溫度、離子濃度、pH等）的影響而從氧化硅上脫落，進(jìn)而影響疫苗的穩(wěn)定性。
為了解決上述存在的技術(shù)問題，本發(fā)明采用了以下方案：
一種花型氧化硅納米顆粒疫苗的制備方法，包括如下步驟：
步驟1、制備花型氧化硅納米顆粒；
步驟2、所述花型氧化硅納米顆粒氨基化；
步驟3、戊二醛活化氨基化了的花型氧化硅納米顆粒；
步驟4、制備載有抗原的花型氧化硅納米顆粒；
步驟5、加入佐劑溶液使得載有抗原的花型氧化硅納米顆粒吸附佐劑，得到同時(shí)載有抗原和佐劑的花型氧化硅納米顆粒。
優(yōu)選地，所述步驟4中將活化后的花型氧化硅納米顆粒與抗原混合，攪拌之后靜置，離心，洗滌，得到載有所述抗原的花型氧化硅納米顆粒。
優(yōu)選地，所述步驟4中添加的抗原為蛋白質(zhì)抗原（OVA）、多肽抗原GPC-3、多肽抗原Trp2、多肽抗原M27或多肽抗原M30中的一種或幾種的組合。
優(yōu)選地，所述步驟5中添加的佐劑為TLR激動(dòng)劑。
優(yōu)選地，所述的TLR激動(dòng)劑為CpG、R848、PolyI:C中的一種或多種的組合。
優(yōu)選地，步驟1中將CTAB與正丁醇混合后，依次添加尿素、環(huán)己烷和正硅酸乙酯（TEOS），使得混合物上下兩相混合均勻，再經(jīng)過加熱、攪拌、離心、洗滌、烘干、煅燒后獲得花型氧化硅納米顆粒。
優(yōu)選地，所述步驟2中按順序加入正己烷，所述步驟1所得花型氧化硅納米顆粒和3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）混合，冷凝回流、洗滌、干燥后得到氨基化了的花型氧化硅納米顆粒。
優(yōu)選地，所述步驟3中戊二醛溶液與氨基化了的花型氧化硅納米顆粒混合，依次經(jīng)過超聲分散、密封、水浴、離心以及洗滌得所述戊二醛活化氨基化了的花型氧化硅納米顆粒。
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