[發(fā)明專利]一種呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010111805.9
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN111394425A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周建華;劉廙人
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi);禹小明

1.一種呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、受試者將呼吸氣體通過呼氣管呼入裝有消化裂解液的核酸提取管內(nèi)，其中，所述呼氣管內(nèi)壁設(shè)有核酸富集載體，呼氣管的末端位置位于核酸提取管液面下；

S2、將呼氣管轉(zhuǎn)移固定至裝有核酸洗脫液和核酸擴(kuò)增液的核酸擴(kuò)增管內(nèi)，充分混勻，其中，呼氣管的末端位置位于核酸擴(kuò)增管液面下；

S3、去除恒溫加熱套的封套，將核酸擴(kuò)增管放置于恒溫加熱套內(nèi)，進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S1中，所述呼氣管的末端位置位于核酸提取管液面下三分之二處。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S1中，所述消化裂解液包括含有800 mM鹽酸胍、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %的Tween-20、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 %的TritonX-100和濃度為20 mg/mL的蛋白酶K 的50 mM Tris-HCl 緩沖溶液，其中Tris-HCl緩沖溶液的pH值為8.0。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S1中，所述核酸富集載體為陽離子濾膜。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S2中，所述核酸洗脫液包括含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 %的Tween-20的10 mM Tris-HCl 緩沖溶液，其中Tris-HCl 緩沖溶液的pH值為8.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S2中，所述核酸擴(kuò)增液包括Bst DNA聚合酶、游離堿基和引物。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S3中，所述恒溫加熱套內(nèi)填充的發(fā)熱填料為單質(zhì)金屬粉末、鹽、水和活性炭的混合物。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S3中，所述擴(kuò)增反應(yīng)為環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，步驟S3中，所述擴(kuò)增反應(yīng)的溫度為60-65 ℃，時(shí)間為15-20 min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的呼吸道傳染病毒核酸快速富集擴(kuò)增方法，其特征在于，所述呼吸道傳染病毒包括2019新型冠狀病毒（NCP）或嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）病毒。