[發明專利]一種用于篩選優質西藏棕色蘑菇的DNA條形碼、引物及其應用

有效

• 申請號: 202010108852.8
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111235294B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 楊滿軍;汪艷;郭曉飛;德吉;牟濤;秦強;李俊
• 申請（專利權）人: 拉薩市高原生物研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

1.用于篩選優質西藏棕色蘑菇的DNA條形碼，其特征在于，篩選總蛋白和總可溶性蛋白含量高的西藏棕色蘑菇的DNA條形碼由核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1～3所示的DNA片段組成。

2.權利要求1所述的DNA條形碼在篩選或輔助選育優質西藏棕色蘑菇品種中的應用，其特征在于，在篩選或輔助選育總蛋白和總可溶性蛋白含量高的西藏棕色蘑菇品種中的應用。

3.根據權利要求2所述的DNA條形碼在篩選或輔助選育優質西藏棕色蘑菇品種中的應用，其特征在于，所述DNA條形碼擴增引物由上下游核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO：18～23所示的擴增引物組合組成。

4.一種利用權利要求1所述DNA條形碼篩選優質西藏棕色蘑菇品種的方法，其特征在于，篩選總蛋白和總可溶性蛋白含量高的西藏棕色蘑菇，包括如下步驟：

S1.提取待測樣品基因組DNA；

S2.以S1基因組DNA為模板，根據性狀篩選需求，選擇SEQ?ID?NO：18～23所示的擴增引物組合分別進行PCR擴增反應；

S3.將S2的PCR擴增產物經毛細管熒光電泳檢測，通過擴增產物的片段數、SSR位點數、SSR重復元件及其重復次數進行判定。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟S2所述PCR擴增反應的體系為2×TaqPCR?Master?Mix?5μL，模板1μL，上游引物0.1μL，下游引物0.4μL，濃度10μM帶熒光的M13引物0.4μL，用無菌的去離子水定容至10μL。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟S2所述PCR擴增反應的程序為95℃預變性3min；95℃變性30s，62至55℃降落PCR退火30s，72℃延伸30s，共10個循環；95℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，共25個循環；72℃終延伸20min；4℃保溫6h。