[發明專利]一種替諾呋韋艾拉酚胺中基因毒性雜質的含量檢測方法

有效

• 申請號: 202010106763.X
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號: CN111239285B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 劉宇晶;利虔;趙小君;薛燕;諶宗永
• 申請（專利權）人: 北京陽光諾和藥物研究有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王春霞

本發明公開了一種替諾呋韋艾拉酚胺中基因毒性雜質的含量檢測方法。本發明檢測方法包括如下步驟：將待測的替諾呋韋艾拉酚胺配制成供試品溶液，將雜質E和雜質G配制成不同濃度的對照品溶液；將對照品溶液分別進行高效液相色譜檢測，分別以雜質E和G的色譜峰面積作為縱坐標，分別以對照品溶液中雜質E和G的濃度作為橫坐標制作標準曲線；將試品溶液進行所述高效液相色譜檢測，得到供試品溶液中雜質E和G的峰面積，根據標準曲線，即得到替諾呋韋艾拉酚胺中雜質E和G的含量。使用本發明方法可以大大提高檢測方法的靈敏度，設備儀器均為普通，檢測成本低廉，操作極為簡便，大大節約了檢測成本和檢測時間。

技術領域

本發明涉及一種替諾呋韋艾拉酚胺中基因毒性雜質的含量檢測方法，屬于藥物分析技術領域。

背景技術

替諾呋韋艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide fumarate，化合物I)，商品名Vemlidy，2016年11月10日獲得FDA批準，是近10年來FDA批準的首個乙肝藥物，之后又于2016年12月19日在日本上市，并于2017年1月9日獲得歐洲EMA批準。

2017年4月20日，歐洲肝臟研究學會發布了2017版最新乙型肝炎管理指南，其中對于初治慢乙肝患者的一線首選核苷(酸)類似物治療方案，在原有的富馬酸替諾福韋二吡呋酯和恩替卡韋之外，指南增加了替諾呋韋艾拉酚胺。對于患有腎臟疾病或骨骼疾病和/或有發生上述疾病風險的患者，特別是曾經有過核苷類似物暴露的人群，指南推薦應首選替諾呋韋艾拉酚胺治療。

專利WO2013052094(A1)和NUCLEOSIDES,NUCLEOTIDESNUCLEIC ACIDS,20(4-7),621-628(2001)公開了替諾呋韋艾拉酚胺的制備方法，合成路線如下所示：

基因毒性雜質(genotoxic impurity)是指能直接或間接損害DNA，導致基因突變或具有致癌傾向的物質。其特點是在濃度很低時即可造成人體遺傳物質的損傷，具有致突變性和致癌性，在用藥過程中嚴重威脅到人類的健康。

經分析發現，上述方法制備的替諾呋韋艾拉酚胺中存在雜質E(異丙基-苯基((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙烷-2-基)氧代)甲基)磷酸)和雜質G((R)-二異丙基(((1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙烷-2-基)氧代)甲基)磷酸)。依據ICH M7分析，這兩個雜質具有膦酸烷基酯(alkyl esters of phosphonic acids)警示結構，故應按基因毒性雜質進行研究和控制。

在基因毒性的控制過程中，一個重要的概念就是毒理學關注閾值(threshold oftoxicological concern，TTC)，其限度(1.5μg/d)作為基因毒性雜質的可接受限度，低于該限度，則不能觀察到顯著的毒理作用。具體定義是：在人的一生(70歲)中，每天攝入1.5μg的基因毒性雜質，其致癌的風險是可以接受的。依據上述原則，替諾呋韋艾拉酚胺的基因毒性雜質限度為60ppm。因此需要提供替諾呋韋艾拉酚胺中基因毒性雜質的含量檢測方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種替諾呋韋艾拉酚胺(9-[(R)-2-[[(S)-[[(S)-1-(異丙氧羰基)乙基]氨基]苯氧基氧膦基]甲氧基]丙基腺嘌呤半反丁烯二酸鹽)中基因毒性雜質的含量檢測方法。

本發明所涉及的基因毒性雜質為式Ⅰ所示雜質E(異丙基-苯基((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9基)丙烷-2-基)氧代)甲基)磷酸)和式Ⅱ所示雜質G((R)-二異丙基(((1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙烷-2-基)氧代)甲基)磷酸)：

具體地，本發明所提供的替諾呋韋艾拉酚胺中基因毒性雜質的含量檢測方法，包括如下步驟：