[發(fā)明專利]檢測人TPMT基因和NUDT15基因多態(tài)性的組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010105523.8
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號: CN111235264B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龍鳳英;吳康;繆為民;戴立忠
• 申請（專利權(quán)）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11270
• 代理人: 黃景輝;張穎玲

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，更具體的，涉及人TPMT基因和NUDT15基因多態(tài)性檢測領(lǐng)域。提供了一種組合物，其檢測人TPMT基因和NUDT15基因多態(tài)性；與此同時，還提供了所述組合物用于檢測人TPMT基因和NUDT15基因多態(tài)性的用途、包含所述組合物的試劑盒以及用于檢測人TPMT基因和NUDT15基因多態(tài)性的方法，使用本發(fā)明的組合物以及方法，檢測TPMT的3個SNP位點和NUDT15一個檢測位點，使得檢測巰嘌呤藥物代謝能力更加全面，且靈敏度高，檢測迅速。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，更具體的，屬于人TPMT基因和NUDT15基因多態(tài)性檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

巰嘌呤類藥物如6-巰基嘌呤(mercaptopurine，6-MP)、6-硫鳥嘌呤(thioguanine，6-TG)和硫唑嘌呤(azathioprine，AZP)等是一類具有免疫抑制作用的抗代謝藥。6-TG和6-MP常用于惡性腫瘤的化療，AZP則主要用于自身免疫性疾病及器官移植患者。硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶(TPMT)活性表現(xiàn)出單基因共性遺傳并分解代謝硫嘌呤。TPMT等位基因變異與酶活性低和硫嘌呤的明顯藥理作用有關(guān)。NUDT15基因中導(dǎo)致其功能喪失的等位基因在亞洲人和西班牙裔中很常見，其可降低活性硫嘌呤核苷酸代謝產(chǎn)物的降解。2018年CPIC指南推薦了基于TPMT和NUDT15基因型來調(diào)整巰基嘌呤的用藥劑量。

巰嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶(thiopurineS-methyltransferase，TPMT)是一種催化巰嘌呤類藥物如6-巰嘌呤(6-mercatopurine，6-MP)硫代甲基化的胞漿酶。在體內(nèi)6-MP代謝為硫鳥嘌呤核苷酸(6-TGN)摻入DNA而發(fā)揮細胞毒效應(yīng)，但通過TPMT甲基化可生成無活性的代謝產(chǎn)物。TPMT活性與6-MP的療效和毒性反應(yīng)相關(guān)，TPMT的遺傳多態(tài)性與嘌呤類藥物的療效和毒性有關(guān)，人體TPMT活性呈三態(tài)分布，約90％的個體為TPMT野生型的高酶活性者；10％的個體為TPMT雜合子變異者，表現(xiàn)出中等酶活性；0.3％的個體為TPMT純合子變異者，導(dǎo)致TPMT活性低或無活性。TPMT雜合子變異者可耐受65％的6-MP標準劑量，純合突變者僅能耐受5％～10％的標準劑量。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)20余種TPMT基因突變，其中TPMT*2、TPMT*3最為常見，占中等酶活性和低酶活性個體的90％以上。活性高的患者長期服用巰嘌呤類藥物易產(chǎn)生耐受性，可能增加復(fù)發(fā)率；活性低的患者即使使用常規(guī)劑量的硫嘌呤類藥物，也會增加發(fā)生嚴重的血液學(xué)不良反應(yīng)的風險，甚至會導(dǎo)致患者死亡。FDA已批準在6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤和硫唑嘌呤的藥品說明書中增加在用藥前進行TPMT基因多態(tài)性檢測的建議。

核苷二磷酸鏈接部分X型結(jié)構(gòu)域基因15(NUDT15)基因編碼的水解酶能使硫唑嘌呤的活性代謝物6-TGTP和6-TGDP去磷酸化而減少毒性，是硫嘌呤活化和毒性的負調(diào)節(jié)劑。NUDT15基因的突變導(dǎo)致硫嘌呤的代謝不良，并且與硫嘌呤誘導(dǎo)的早期白細胞減少有關(guān)。盡管目前尚缺乏多民族研究來檢驗這兩種TPMT和NUDT15變體，實際上，TPMT與NUDT15活性降低功能的攜帶者對硫嘌呤的耐受程度(例如巰基嘌呤)在很大程度上相似。因此，CPIC對NUDT15多態(tài)性檢測的建議與TPMT相似。對于NUDT15正常代謝者(NUDT15*1/*1)，無需更改起始劑量。對于NUDT15中間代謝物(NUDT15*1/*3)，應(yīng)考慮減少起始劑量以盡量減少毒性，對于NUDT15弱代謝者(NUDT15*3/*3)應(yīng)降低用藥劑量大幅或考慮使用替代藥物。

目前，存在一些可以檢測兩者的基因多態(tài)性的產(chǎn)品。例如中國發(fā)明公開CN109486932A公開了可以檢測TPMT基因的rs1142345位點和NUDT15基因的rs116855232位點中的至少一種；中國發(fā)明公開CN107574239A也提及檢測巰嘌呤藥物SNP需要檢測TPMT基因的rs1142345位點和NUDT15基因的rs116855232位點。但是由于TPMT所對應(yīng)的SNP位點不只有這一個，CPIC指南建議檢測TPMT基因和NUDT15基因四個多態(tài)性位點，因此，這兩者都存在著檢測巰嘌呤藥物代謝能力的不準確和不全面的缺陷。