[發(fā)明專利]一種真菌檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010103411.9
• 申請(qǐng)日: 2020-02-19
• 公開（公告）號(hào): CN111154830B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈弢;張浩;呂琳婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04;C12N1/02;C12R1/72;C12R1/66;C12R1/785
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 陳丹;張奎燕

本申請(qǐng)公開一種真菌檢測(cè)試劑盒，包括磁珠和平衡液，其中，所述平衡液包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖和麥芽糖，所述磁珠與所述平衡液的比例為50mg?100mg:1ml。本申請(qǐng)還公開一種富集真菌的方法。使用本申請(qǐng)的真菌檢測(cè)試劑盒富集真菌快速，方便，成本低；富集效果明顯；避免了反復(fù)離心。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及真菌檢測(cè)領(lǐng)域，具體地涉及一種真菌檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，由于腫瘤患者，器官移植，免疫缺陷和免疫受損患者的人數(shù)逐漸增多，真菌感染的發(fā)病率大大增加，尤其是深部真菌的感染。由于真菌感染早期缺乏特征性的癥狀，臨床上難以早期診斷。而且對(duì)于侵入性真菌感染早期，體內(nèi)收集的液體標(biāo)本中，例如組織液、血液、腦脊液、胸腹水、尿液和痰液，真菌量少，因此對(duì)標(biāo)本直接鏡檢很難檢測(cè)出真菌。雖然使用分子生物學(xué)的方法能夠較快速的檢測(cè)標(biāo)本中致病菌真菌的DNA，但是此方法仍然存在一定的假陰性或假陽性結(jié)果干擾診斷。目前，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行真菌培養(yǎng)仍然是真菌感染的診斷最可靠和準(zhǔn)確的方法。但是當(dāng)標(biāo)本的量很大或標(biāo)本中真菌量少時(shí)，培養(yǎng)結(jié)果很可能為陰性，導(dǎo)致漏診。因此提高標(biāo)本中真菌檢出率具有重要的臨床意義。對(duì)于現(xiàn)有的磁珠富集檢測(cè)方法，其成本高，操作不方便，多需要離心步驟，未能廣泛的應(yīng)用于臨床。

發(fā)明內(nèi)容

以下是對(duì)本文詳細(xì)描述的主題的概述。本概述并非是為了限制權(quán)利要求的保護(hù)范圍。

本申請(qǐng)通過將磁珠和樣品分別用平衡液處理，然后混合用于富集真菌，富集后無論是熒光染色觀察還是直接培養(yǎng)，沉淀菌量都比上清提高。

具體地，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N真菌檢測(cè)試劑盒，包括磁珠和平衡液，所述平衡液包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖和麥芽糖，所述磁珠與所述平衡液的比例為50mg-100mg∶1ml。

在本申請(qǐng)中，所述磁珠可以為Fe₃O₄納米磁珠；

所述Fe₃O₄納米磁珠可以為裸磁珠，或?yàn)楸砻娼?jīng)過硅烷基改性、油酸改性、檸檬酸改性或羧基改性的磁珠，優(yōu)選地為表面經(jīng)過硅烷基改性、油酸改性、檸檬酸改性或羧基改性的磁珠。

在本申請(qǐng)中，所述平衡液可以包括10％w/v-20％w/v葡萄糖、5％w/v-10％w/v甘露糖、2％w/v-5％w/v半乳糖和2％w/v-5％w/v麥芽糖。w/v指的是質(zhì)量體積比，例如，10％指的是10g溶質(zhì)溶于100ml溶劑里。

在本申請(qǐng)中，所述平衡液可以包括15％w/v-20％w/v葡萄糖、8％w/v-10％w/v甘露糖、4％w/v-5％w/v半乳糖和4％w/v-5％w/v麥芽糖。

在本申請(qǐng)中，所述平衡液還可以包括組胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸和谷氨酰胺。

在本申請(qǐng)中，所述平衡液還包括2.5％w/v-5％w/v交聯(lián)劑；

所述交聯(lián)劑可以選自糊精、乙烯基三乙氧基硅烷、硼酸和對(duì)甲苯磺酸中的任一種或更多種。

在本申請(qǐng)中，溶劑為0.9％醫(yī)用生理鹽水，盡量維持細(xì)胞穩(wěn)定的形態(tài)，利于樣本的儲(chǔ)存。

在本申請(qǐng)中，所述真菌可以選自念珠菌、曲霉以及毛霉中的任一種或更多種。

本申請(qǐng)還提供一種富集真菌的方法，所述方法包括：

(1)將磁珠和樣品分別用平衡液處理；

(2)將處理后的磁珠與處理后的樣品混合，靜置；

(3)將步驟(3)獲得的混合物放置于磁場(chǎng)中，棄去上清液，收集磁珠沉淀，

其中，步驟(1)中的磁珠和平衡液為前述真菌檢測(cè)試劑盒中的磁珠和平衡液。