[發明專利]一種載脂蛋白J活性的測定方法

在審

• 申請號: 202010101385.6
• 申請日: 2020-02-19
• 公開（公告）號: CN113278678A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 陳翔;杜佩云;蔡文凱
• 申請（專利權）人: 廈門德馨尚品醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;G01N33/92;G01N21/31
• 代理公司: 北京市中聯創和知識產權代理有限公司 11364
• 代理人: 王錚;張松林

1.一種載脂蛋白J活性的測定方法，其特征在于，向谷胱甘肽S-轉移酶(GST)中加入適量的載脂蛋白J，通過測定谷胱甘肽S-轉移酶在熱處理前、后的比活的變化來計算載脂蛋白J的活性。

2.根據權利要求1所述載脂蛋白J活性的測定方法，其特征在于，包括：S1、取載脂蛋白J和谷胱甘肽S-轉移酶按至少3個不同比例混合均勻，補加PB緩沖液至一定體積；S2、升溫進行熱處理；S3、測定加熱前、后的谷胱甘肽S-轉移酶的酶活并計算相應的比活；S4、根據測得的谷胱甘肽S-轉移酶比活與載脂蛋白J的濃度關系進行擬合，將加熱前GST的初始比活的1/2對應載脂蛋白J的濃度定義為1unit/ml，計算載脂蛋白J的比活。

3.根據權利要求2所述載脂蛋白J活性的測定方法，其特征在于，所述熱處理的條件為40-80℃加熱3-30min。

4.根據權利要求2所述的載脂蛋白J活性的測定方法，其特征在于，步驟S3中谷胱甘肽S-轉移酶酶活的測定方法為：

S31、向磷酸緩沖液加入CDNB溶液及GSH溶液，并加水稀釋至V₁，配置底物反應液；

S32、將配制好的底物反應液放置進行20-30℃預熱；

S33、取待測酶液加到預熱的底物反應液中，開始計時，迅速吹打均勻后，取V₂體積的待測液，加到酶標板上的兩個孔中，測定反應1min和T分鐘(T＞1)后的吸光值，記錄數據；

S34、按如下公式計算GST的酶活：GST_酶活(unit/ml)＝ΔA_340差值*10⁶*V_反總*稀釋倍數/ε/d/V_樣/△T，其中：ΔA_340差值為波長340nm時吸光度凈升值；ε為25℃、波長340nm處結合產物的摩爾吸光系數為9600mol^-1*cm^-1*L；V_反總為最終反應體積(L)；V_樣為標本體積(ml)；d：酶標板光徑約為0.552cm；△T＝(T-1)min。

5.根據權利要求2所述的載脂蛋白J活性的測定方法，其特征在于，GST比活的計算公式為：GST_比活＝GST_酶活/C_pr，其中C_pr為GST的濃度(mg/ml)。

6.根據權利要求2所述的所述的載脂蛋白J活性的測定方法，其特征在于，步驟S4中根據測得的GST比活與載脂蛋白J的濃度關系進行擬合為：以GST比活為y軸，載脂蛋白J的濃度為x軸，進行S型曲線擬合。

7.根據權利要求2所述的所述的載脂蛋白J活性的測定方法，其特征在于，載脂蛋白J的酶活是指按加熱前的GST初始比活的1/2即EC50對應的載脂蛋白J的濃度的酶活定義為1unit/ml。

8.權利要求1-7任一項所述的載脂蛋白J活性的測定方法在測定天然/重組載脂蛋白J活性中的運用。