[發明專利]一株自然適應體外細胞培養的雞傳染性法氏囊病病毒經典株及其應用

有效

• 申請號: 202010090643.5
• 申請日: 2020-02-13
• 公開（公告）號: CN111235117B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 祁小樂;王笑梅;高玉龍;高立;李凱;崔紅玉;劉長軍;潘青;張艷萍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心)
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

本發明公開了一株自然適應體外細胞培養的雞傳染性法氏囊病病毒經典株及其應用。所述的雞傳染性法氏囊病病毒經典株命名為IBD17JL01，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC No.19291。該病毒株為本發明首次分離鑒定的一株自然適應DF1和CEF體外細胞培養的雞傳染性法氏囊病病毒經典毒株，該株病毒能夠直接在體外傳代細胞系DF1細胞、CEF細胞或DT40細胞上增殖。將該毒株滅活后制備成滅活疫苗，可使免疫雛雞對強毒攻擊產生100％的保護效果。因此，該病毒株(IBD17JL01株)可以作為天然適應體外細胞培養的疫苗候選株，用于IBDV的免疫防控。

技術領域

本發明涉及一株新型的雞傳染性法氏囊病病毒株及其應用，特別涉及一株自然適應體外細胞培養的雞傳染性法氏囊病病毒經典株及其應用。本發明屬于生物技術領域。

背景技術

傳染性法氏囊病(infectious bursal disease，IBD)是雞的一種重要的免疫抑制病，其病原是傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)。IBDV有兩個血清型：血清I型和血清II型。血清I型對雞致病，血清II型對雞不致病。血清I型分為經典株、超強毒株和變異株，經典株和超強毒株的抗原性一致。IBDV經典株引起的傳染性法氏囊病首次于1957年在美國爆發。上世紀80年代末，IBDV變異株和超強毒相繼出現并迅速傳遍全球。目前這三種毒株在我國均流行。

IBDV對養禽業的危害分直接危害和間接危害。直接危害：摧毀中樞免疫器官法氏囊，且能直接致死。間接危害：IBDV感染耐過的雞免疫力低下，造成禽流感、新城疫等其它重要疫病的疫苗免疫失敗，且易造成繼發感染，影響雞群生產性能，造成嚴重經濟損失。總之，IBD嚴重影響養禽業的健康發展，其防控形勢十分嚴峻。

IBDV的基因組由A、B兩個節段組成。A節段全長約3200bp，編碼多聚蛋白(PP，VP2-VP4-VP3)和VP5蛋白，PP進一步自剪切成熟為VP2、VP3、VP4。其中，VP2和VP3是IBDV重要的結構蛋白。VP2是組成病毒衣殼的重要成分，其位于病毒粒子的最外側，是關鍵的宿主保護性抗原。B節段全長約2800bp，編碼具有RNA依賴的RNA聚合酶活性的VP1蛋白，其在病毒基因的轉錄和翻譯中發揮重要作用。

疫苗免疫是IBD防控的重要手段。是否能夠獲得適應體外細胞培養的疫苗株是疫苗研制和生產的關鍵瓶頸。然而，自然界中尚未發現能夠適應雞胚成纖維細胞(CEF細胞)及其傳代細胞系DF1等體外細胞培養的IBDV野毒株，所以目前市場上的IBDV全病毒疫苗株均是來源于人工傳代。傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)的人工傳代技術存在如下缺點：①該過程費時費力，研發成本高，時效性差。②傳代過程中，毒株的抗原性有可能發生變異，進而造成疫苗株與流行毒株的抗原匹配性差。③傳代結果具有隨機性，不一定每個傳代試驗都能獲得理想的毒株。

本發明首次分離鑒定了一株自然適應DF1和CEF等體外細胞培養的雞傳染性法氏囊病病毒經典毒株(IBD17JL01株)，通過基因擴增和測序確定了病毒的全基因組，此外還檢測了該病毒株的細胞嗜性，評估了其致病力，以期為雞傳染性法氏囊病疫苗的研制提供一種新的技術手段。

發明內容

本發明的目的在于提供一株自然適應體外細胞培養的雞傳染性法氏囊病病毒經典株及其在制備雞傳染性法氏囊病滅活疫苗中的用途。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明分離得到的一株自然適應體外細胞培養的雞傳染性法氏囊病病毒經典株，命名為IBD17JL01，分類命名為雞傳染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal D iseaseVirus，IBDV)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No.19291，保藏時間為2020年01月08日。