[發明專利]一種氧化石墨烯磁珠、抗體偶聯氧化石墨烯磁珠及其在細胞分選中的應用有效
| 申請號： | 202010083035.1 | 申請日： | 2020-02-07 |
| 公開（公告）號： | CN111724954B | 公開（公告）日： | 2023-01-20 |
| 發明（設計）人： | 王明連;梁天亞;王群 | 申請（專利權）人： | 宴晶科技（北京）有限公司 |
| 主分類號： | H01F1/00 | 分類號： | H01F1/00;H01F1/09;C01B32/198;C12N5/0783;C12N13/00 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 董大媛 |
| 地址： | 100176 北京市大興區經*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 氧化 石墨 烯磁珠 抗體 及其 細胞 分選 中的 應用 | ||
1.一種應用于細胞分選的抗體偶聯氧化石墨烯磁珠，其特征在于，在氧化石墨烯磁珠的石墨烯殼層偶聯CD3抗體；
所述氧化石墨烯磁珠包括氮化鐵磁珠核心和包覆在所述氮化鐵磁珠核心表面的石墨烯殼層，所述石墨烯殼層經過插層氧化修飾；
所述氧化石墨烯磁珠的粒徑為500nm～2μm；
所述氧化石墨烯的制備方法包括以下步驟：
1)將石墨烯包覆的氮化鐵磁珠、硝酸鈉、硫酸和高錳酸鉀混合獲得第一混合料液；
2)將所述第一混合料液超聲分散后，與水混合獲得第二混合料液；
3)將所述第二混合料液進行插層氧化獲得氧化石墨烯磁珠；所述插層氧化的溫度為80～90℃，所述插層氧化的時間為3～8min；
偶聯CD3抗體的免疫磁珠的制備方法，包括以下步驟：
I)磁珠表面氧化石墨烯上的羧基活化，所述活化溫度為15～25℃，所述活化時間為12～18min；
II)活化后的磁珠與CD3抗體偶聯，所述偶聯溫度為15～25℃，所述偶聯時間為2～4h；
步驟I)中羧基活化劑為EDC和NHS。
2.根據權利要求1所述的抗體偶聯氧化石墨烯磁珠，其特征在于，步驟2)中所述超聲分散的溫度為30～40℃，所述超聲分散的時間為25～35min。
3.根據權利要求1所述的抗體偶聯氧化石墨烯磁珠，其特征在于，步驟3)中所述插層氧化后還包括離心、水洗和烘干步驟。
4.根據權利要求3所述的抗體偶聯氧化石墨烯磁珠，其特征在于，所述離心的轉速為7000～8000rpm，所述離心的時間為8～12min。
5.權利要求1～4任一項所述抗體偶聯氧化石墨烯磁珠的制備方法，包括以下步驟：
I)磁珠表面氧化石墨烯上的羧基活化，所述活化溫度為15～25℃，所述活化時間為12～18min；
II)活化后的磁珠與CD3抗體偶聯，所述偶聯溫度為15～25℃，所述偶聯時間為2～4h；
步驟I)中羧基活化劑為EDC和NHS。
6.權利要求1所述的抗體偶聯氧化石墨烯磁珠在細胞分選中的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，將所述抗體偶聯氧化石墨烯磁珠與待分選的細胞混合后進行磁分離，收集磁珠、洗滌；所述抗體偶聯氧化石墨烯磁珠對分選出的T細胞具有刺激增殖的作用。
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