[發明專利]一種以含蛋白多糖復合物皮粉為底物的糖苷酶活力測定和性能評價方法

有效

• 申請號: 202010082876.0
• 申請日: 2020-02-07
• 公開（公告）號: CN111172233B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 彭必雨;羅鳳香;鐘祥;高蒙初;張春曉;龍忠珍
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種以含蛋白多糖復合物皮粉為底物的糖苷酶活力測定和性能評價方法。該方法以天然動物皮為原料，制備含蛋白多糖復合物的皮粉底物；糖苷酶催化皮粉中蛋白多糖復合物水解并從皮粉中溶出，以單位時間內反應液中總糖的產生量來表征酶活力。本發明的糖苷酶活力表征方法包括以下步驟：（1）底物的制備；（2）糖苷酶活力的測定；（3）糖苷酶活力計算。本方法所用底物含與膠原結合緊密的、難以被普通酸堿破壞的動物皮中原有的蛋白多糖復合物，反應過程模擬了制革、制裘等動物皮加工過程中的固液反應，可以在較寬的pH范圍測定不同糖苷酶的活力和性能，測定結果能為制革或制裘生產中糖苷酶的篩選、應用條件的優化和技術的開發提供指導。

技術領域

本發明涉及糖苷酶的活力檢測方法，具體涉及制革和制裘等動物皮加工利用領域中所使用的糖苷酶的活力測定和性能評價方法及其應用。

背景技術

蛋白多糖復合物，這里主要包括蛋白多糖和糖蛋白，是動物皮內纖維間質中的主要成分。它們能夠使毛粘附于毛囊、膠原分子粘結形成膠原纖維。因此，在制革和制裘生產中必須去除這些物質，以便達到纖維分散和脫毛的效果。研究表明這些物質的去除與皮革或裘皮的質量緊密相關，這些物質的含量越低，皮革或裘皮的柔軟度越好。

糖苷酶能特異性水解蛋白多糖復合物中的糖苷鍵，因此能在溫和的條件下有效破壞并去除蛋白多糖復合物。另一方面，糖苷酶能夠水解其中的糖鏈而不水解蛋白，比蛋白酶更安全。研究表明α-淀粉酶和α-半乳糖苷酶能夠促進纖維分散，提高成革柔軟度，木聚糖酶能夠去除皮垢和皮上的色素，獲得粒面潔白的皮革。實際上，能夠水解糖苷鍵的糖苷酶是一個巨大的家族，有超過200類糖苷酶，因此具有巨大的開發潛力。可以從其中篩選合適的糖苷酶并開發更清潔、價廉、高效的去除蛋白多糖復合物的糖苷酶技術。

不同的糖苷酶對不同的蛋白多糖復合物具有水解特異性，包括糖苷鍵、組成糖苷鍵的糖基和糖基配體的特異性。為了篩選合適的糖苷酶應用于制革和制裘領域，需要評價具有不同底物特異性的糖苷酶對動物皮內蛋白多糖復合物的水解活力。但目前糖苷酶的活力測定和性能評價方法中使用的底物都是基于其應用領域如食品、飼料、紡織和釀造工業等，例如以淀粉為底物評價淀粉酶的活力，以濾紙為底物評價纖維素酶活力，以木聚糖為底物評價木聚糖酶活力。這些底物與動物原料皮中具有三維空間結構的膠原微原纖維復合在一起的蛋白多糖復合物結構差異巨大，因此現有方法并不能反映糖苷酶對皮內蛋白多糖復合物的實際去除效果，也不能指導其實際應用。此外，這些方法所測定的不同種類的糖苷酶活力之間不能相互比較。

發明內容

為填補目前尚未有適合制革、制裘等動物皮加工利用領域的糖苷酶活力測定方法的空白，使不同糖苷酶的水解效果具有可比性，本發明提供了一種以含蛋白多糖復合物皮粉為底物的糖苷酶活力測定和性能評價方法。該方法以含動物皮內原有的蛋白多糖復合物的皮粉為底物，通過測定糖苷酶水解皮粉中蛋白多糖復合物后反應液中可溶性總糖的增加量來表征酶活力。

本發明的另一目的在于根據所述檢測糖苷酶活力的方法，從而優選出能有效去除皮內蛋白多糖復合物的糖苷酶，應用于制革和制裘生產過程，促進纖維分散和脫毛、促進制革和制裘清潔生產并獲得高質量皮革或裘皮。

可實現上述發明目的一種以含蛋白多糖復合物皮粉為底物的糖苷酶活力測定和性能評價方法，包括以下步驟：

1)含蛋白多糖復合物皮粉底物的制備：

取保存較好的動物皮(如豬皮、羊皮和牛皮等，包括新鮮的、鹽腌的或冷凍保存的動物皮等)100份，充分水洗，去肉、脫脂后剖層，取厚約0.5-1.5mm的粒面層，稱重后放入轉鼓或振蕩器中，加入清水100-400份，防腐劑0-0.5份，在15-25℃下浸泡或間隙轉動3-12h，再用300-500份水洗滌3次，每次30min，然后進行去毛，將皮切成小塊，自然干燥或冷凍干燥后用皮革碾磨儀打成皮粉，并過50-150目篩，然后加入100-800份洗滌液反復洗滌，直到上清液中的總糖含量低于檢測限，將皮粉再次干燥，得到含糖量0.01％-2％的皮粉底物；

2)糖苷酶活力的測定：