[發明專利]一種快速檢測沙眼衣原體的RDA方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202010081192.9
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN112301104A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 劉華勇;謝嬋芳;黃嘉恩;陳翀
• 申請（專利權）人: 廣州普世利華科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11
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本發明公開一種快速檢測沙眼衣原體的RDA方法及試劑盒，包括特異性引物對以及RDA熒光標記探針，以實現對沙眼衣原體（CT）進行安全、特異、靈敏、簡便的檢測，從而彌補現有傳統檢測技術的不足。此方法提供的試劑盒可省去核酸提取步驟，并在37～42℃恒溫條件下、20min內實現沙眼衣原體的檢測，特異性為100％，非常適用于現場快速檢測。與普通PCR方法相比，RDA熒光法是在恒溫下反應，不需變溫，不需復雜儀器，而且反應時間短。因此，本發明的方法及其試劑盒具有操作簡單、快速、特異性好、靈敏度高、成本低廉等特點，為沙眼衣原體的現場快速檢測篩查提供有效的技術手段，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域。更具體地，涉及一種基于RDA熒光法檢測技術檢測沙眼衣原體核酸的引物對、探針及相關試劑盒。

背景技術

沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis，CT）泌尿生殖道感染是近年來國內外最常見的性傳播疾病之一。據2017年WHO統計，全球CT感染每年新發病例約有1.31億，超過梅毒、淋病，位居首位。中國105個監測點數據顯示，生殖道CT感染報告發病率由2008 年的32. 48/10萬上升到2015年的37. 18 /10萬，年均增長1. 95%。下生殖道CT感染的女性中超過70%為隱匿性感染，無明顯的臨床癥狀，往往被患者所忽視延誤診治，造成慢性持續性感染，進一步導致嚴重并發癥。例如，男性附睪炎和前列腺炎，女性宮頸炎、盆腔炎、輸卵管炎、異位妊娠和不孕癥等；也可通過產道傳播，引起新生兒眼結膜炎和肺炎。此外CT 感染還是人類乳頭瘤病毒致宮頸癌的協同因子，以及HIV感染的重要協同因素。因此，對有感染高危因素的男女易感群體，進行CT感染的快速早期診斷與篩查，可有效控制泌尿生殖道CT 感染與傳播，對降低繼發不孕等并發癥的發生率而具有重大意義。

沙眼衣原體是一種常見的生殖道感染病原體，大小約250～450nm，具有完整的細胞膜，有細胞壁，其結構和組成類似于革蘭陰性菌。沙眼衣原體感染的實驗室檢測方法主要分為病原體的檢測、沙眼衣原體抗原檢測和分子生物學檢測。其中細胞培養法是CT實驗室檢查的金標準，其特異性達到99%以上，但培養法依賴活的病原體，其敏感性較低，并且受標本采集、保存及運輸的影響大，操作復雜，技術要求高，所需時間長，因此難以應用于臨床大規模檢測及篩查。CT 的抗原檢測方法有直接免疫熒光法、酶聯免疫法、膠體金免疫擴散法等。但是這些檢測方法存在假陽性、交叉反應等缺點。

沙眼衣原體的分子生物學的檢測大多基于PCR，檢測時需要依賴PCR儀或昂貴的實時定量PCR儀，及其它多種配套設備，需配備專門的PCR實驗室和專業操作人員，其成本和應用范圍均受到一定限制。隨著體外核酸恒溫擴增的悄然興起，傳統擴增技術的局限性有所改變，在過去的十年中，使核酸體外擴增變得更加簡單和方便的一些等溫核酸擴增技術已得到快速發展，如LAMP（環介導核酸擴增技術）、HDA（解旋酶依賴等溫核酸擴增技術）等均可在等溫條件下擴增 DNA。這些技術只需要溫度控制裝置來保持一個恒定反應溫度，就可以實現高效的核酸擴增，從而得以擺脫對精密控制溫度變化的 PCR 儀的依賴。若能在更低的溫度條件下，甚至在常溫條件下實現核酸的擴增，將進一步使核酸擴增技術簡單化，并有利于此類技術更廣范圍的應用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有沙眼衣原體檢測技術的缺陷和不足。研究得到一種沙眼衣原體（CT）RDA熒光法檢測試劑盒，實現沙眼衣原體的快速檢測，在檢測CT的整個過程中，從樣本處理到結果完成，僅需20-30min，大大縮短了常規的檢測時間，提高檢測效率。

本發明目的在于，提供優選后的檢測沙眼衣原體的探針及引物對。

所述探針核苷酸序列如SEQ ID NO .1或SEQ ID NO .2所示。