[發(fā)明專利]改變黃瓜卷須性狀的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010079991.2
• 申請日: 2020-02-04
• 公開（公告）號: CN111269932B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊學(xué)勇;黃三文;辛同旭;王博文;閆建斌;王深浩;張忠華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院深圳農(nóng)業(yè)基因組研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/53;C12N5/10;A01H5/04;A01H6/34
• 代理公司: 北京布瑞知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11505
• 代理人: 孟潭

1.一種改變黃瓜卷須性狀的方法，其特征在于，編輯黃瓜中的Csa6G160180基因，使所述基因不表達(dá)，或表達(dá)水平降低，或表達(dá)的蛋白ACC氧化酶失活或活性降低；

所述Csa6G160180基因的核苷酸序列由如下序列組成：

1）SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；或，

2）SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的簡并序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用基因敲除的方法編輯Csa6G160180基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，采用Crispr-Cas9系統(tǒng)敲除SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列中的第425和426位的堿基，使黃瓜卷須失去攀援功能。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，采用Crispr-Cas9系統(tǒng)在SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列中的第426和427位序列中增加一個(gè)堿基，使黃瓜卷須失去攀援功能。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述增加的一個(gè)堿基為G。

6.根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述Crispr-Cas9系統(tǒng)作用的靶位點(diǎn)序列由如下序列組成：

1）SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；或，

2）SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列。

7.根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述Crispr-Cas9系統(tǒng)的sgRNA序列由如下序列組成：

1）SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；或，

2）SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用RNAi干擾編輯黃瓜中的Csa6G160180基因。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，包括（A）：采用RNAi干擾片段干擾Csa6G16018基因中下述1）或2）的核苷酸序列使黃瓜卷須上展現(xiàn)出變態(tài)葉，失去攀援功能：1）SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，或，2）SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列；或

（B）：采用RNAi干擾片段干擾Csa6G16018基因中下述1）或2）的核苷酸序列使黃瓜卷須上長出雄花，失去攀援功能：1）SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，或，2）SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，在（A）中擴(kuò)增所述RNAi干擾片段的PCR引物包括上游引物F1和下游引物R1，其中F1的序列為5′-CGTAATGAAACAATTCGCGTC-3′(SEQ IDNO.6)；R1的序列為5′-GGCGGCACGTCCACCCACTCC-3′(SEQ ID NO.7)；或

在（B）中擴(kuò)增所述RNAi干擾片段的PCR引物包括上游引物F2和下游引物R2，其中F2的序列為5′-CACTCGATCGTGGTGAATATC-3′(SEQ ID NO.8)；R2的序列為5′-CGGTTGCAATAGGATCCAAT-3′(SEQ ID NO.9)。