[發明專利]一種同時檢測血液樣品中多種脂溶性維生素的方法及其應用

在審

• 申請號: 202010074340.4
• 申請日: 2020-01-22
• 公開（公告）號: CN111175405A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 張召;刁嘉茵;雷春燕;肖妮;陳濤
• 申請（專利權）人: 廣東南芯醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

本發明公開了一種同時檢測血液樣品中多種脂溶性維生素的方法，先樣品前處理，通過萃取對樣本中的維生素進行提取，再色譜分離及質譜檢測，針對每種維生素分別選擇一對定性離子和一對定量離子，以各種維生素的相對保留時間和定性離子對作為定性依據，以標準品制作標準曲線定量。同時，本方法應用三個水平的質控品考察方法的準確性、有效性，避免檢測結果失真。本發明首次實現了應用LC?MS技術對一份血清樣本中的六種脂溶性維生素同時檢測的目的，減小了干擾物影響，該方法操作簡便快速分析時間僅10min，高通量、成本低，有效監測人體內脂溶性維生素水平，對維生素的合理、安全補充具有指導意義，易于臨床推廣及普及。

技術領域

本發明屬于維生素分析檢測領域，涉及一種同時檢測血液樣品中多種脂溶性維生素的方法及其應用。

背景技術

維生素，分為脂溶性和水溶性維生素兩類，是維持人體生命活動必須的一類有機物質，也是保持人體健康的重要活性物質。維生素缺乏或過量均會導致營養性疾病的發生，維生素A、維生素25(0H)D2、維生素25(0H)D3、維生素E、維生素K1、維生素K2均屬于脂溶性維生素，人體六種維生素缺乏或過量時會表現出不同的癥狀:維生素A缺乏會導致夜盲癥、眼部炎癥等，過量會惡心、頭痛等、易激激動、乏力；維生素D缺乏會導致兒童佝僂病、成人骨質軟化病、老人骨質疏松癥等，過量會導致骨骼退化和鈣化、食欲減退、惡心、嘔吐；維生素E缺乏會導致新生兒溶血性貧血、神經系統疾病等，過量會導致惡心嘔吐、頭疼、血壓升高、口角炎；維生素K缺乏會導致凝血功能障礙、血液凝固時間延長和出血等，過量則會損害肝功能、導致血紅蛋白尿和溶血性貧血。

現有技術中，常用的維生素檢測方法主要包括毛細管電泳法、電化學分析法、高效液相色譜法、高效液相色譜質譜聯用法等。其中電泳法、電化學法、高效液相色譜法存在一定的缺點，如：結果差異大、線性差、衍生化操作復雜、通量小等。而液相色譜質譜具有高靈敏度、高精確度、高通量的特點。且，脂溶性維生素分析方法大多只能單獨測定維生素，

因此，一種基于液相色譜質譜聯用的方法測定血液脂溶性維生素的方法成為急需解決的問題。

發明內容

本發明目的在于提供一種檢測血液樣品中多種脂溶性維生素的液質聯用分析方法。

本發明所采取的技術方案是：

本發明第一方面，提供了一種血液脂溶性維生素的檢測方法，采用液質聯用方法進行檢測，包括以下步驟：

一.溶液的制備

供試品溶液制備：取樣品加入到甲醇中，混勻離心，取上清后用正己烷萃取3～4次，收集上清液，氮氣吹干，甲醇復溶得供試品溶液；

標準品溶液的制備：將維生素A、維生素25(OH)D2、維生素25(OH)D3、維生素E和維生素K2標準品用甲醇溶解配制成標準品母液，將維生素K1用異丙醇溶解為標準品母液，將各標準品母液用甲醇進行稀釋至同一容量瓶中，得到系列不同濃度的混合標準品溶液；

內標溶液制備：將維生素A、維生素25(OH)D2、維生素25(OH)D3、維生素E和維生素K2標準品用甲醇溶解配制成標準品母液，將維生素K1用異丙醇溶解為標準品母液，將各標準品母液用甲醇進行稀釋至同一容量瓶中，得到系列不同濃度的混內標溶液；

二.測定

將上述制備的供試品溶液、標準品和內標溶液進行LC-MS測定。通過本發明使用超高效液相色譜-質譜法檢測血清中六種脂溶性維生素，特異性強，靈敏性高，通量高，結果客觀易于分析，尤其適合臨床普及應用。

根據本發明的實施例，所述樣品為血漿或血清樣品。

根據本發明的實施例，其中洗脫采用梯度方式洗脫，流動相A為5mM甲酸銨和0.1％甲酸混合的乙腈溶液，流動相B為0.1％甲酸和5mM乙酸銨混合的甲醇溶液。