[發(fā)明專利]土著硫酸鹽還原菌、土著脫氮菌聯(lián)合脫除稀土浸礦場(chǎng)地殘留銨鹽淋出液中氨氮的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010070046.6
• 申請(qǐng)日: 2020-01-21
• 公開（公告）號(hào): CN111268808B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖春橋;章鵬;池汝安;胡錦剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢工程大學(xué)
• 主分類號(hào): C02F3/34
• 分類號(hào): C02F3/34;C12N1/02;C12N1/20;C02F101/16
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明;閉釗

1.土著硫酸鹽還原菌、土著脫氮菌聯(lián)合脫除稀土浸礦場(chǎng)地殘留銨鹽淋出液中氨氮的方法，其特征在于包括以下步驟：

(a)采集稀土浸礦場(chǎng)地土壤樣品和淋出液樣品，經(jīng)過分離、富集分別得到土著硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液、土著脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液，對(duì)兩種富集培養(yǎng)液進(jìn)行篩選，分別得到土著硫酸鹽還原菌菌群和土著脫氮菌菌群；

(b)利用土著硫酸鹽還原菌菌群，對(duì)pH為4-6且氨氮濃度不超過300mg/L的酸性稀土浸礦場(chǎng)地殘留銨鹽淋出液進(jìn)行預(yù)處理，使其pH升高至7-8，得到處理后的淋出液；

(c)將土著脫氮菌菌群接種到預(yù)處理后的淋出液中，添加脫氮培養(yǎng)基培養(yǎng)即可；

從土壤樣品或淋出液樣品中分離、富集土著硫酸鹽還原菌的方法具體如下：按照200-500g:1L的比例，將采集來的土壤樣品與無菌水混合并恒溫振蕩培養(yǎng)，靜置后取上清液，得到土壤樣品初始菌懸液；接著按照1:2-3的體積比，將土壤樣品初始菌懸液或采集的淋出液樣品與硫酸鹽還原菌富集培養(yǎng)基混合并恒溫厭氧培養(yǎng)，得到第一次富集的硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液；按照1:3-4的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第一次富集的硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液與硫酸鹽還原菌富集培養(yǎng)基混合再次進(jìn)行恒溫厭氧培養(yǎng)，得到第二次富集的硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液；按照1:4-5的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第二次富集的硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液與硫酸鹽還原菌富集培養(yǎng)基混合進(jìn)行第三次恒溫厭氧培養(yǎng)；重復(fù)上述厭氧培養(yǎng)過程3-5次，得到土壤土著硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液或淋出液土著硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液；所述硫酸鹽還原菌富集培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：蛋白胨8-12份，牛肉膏4-6份，NaCl 4-6份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.45-0.6份，蒸餾水1000份，pH值6.2-6.5；

土著硫酸鹽還原菌菌群篩選方法具體如下：按照1:3-6的體積比，將土著硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液與硫酸鹽還原菌功能篩選培養(yǎng)基混合并恒溫厭氧培養(yǎng)，得到第一次篩選的土著硫酸鹽還原菌菌群；按照1:4-8的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第一次篩選的土著硫酸鹽還原菌菌群與硫酸鹽還原菌功能篩選培養(yǎng)基混合恒溫厭氧培養(yǎng)，得到第二次篩選的土著硫酸鹽還原菌菌群；按照1:5-10的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第二次篩選的土著硫酸鹽還原菌菌群與硫酸鹽還原菌功能篩選培養(yǎng)基混合恒溫厭氧培養(yǎng)；重復(fù)上述篩選培養(yǎng)3-5次，得到土著硫酸鹽還原菌菌群；所述土著硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液選自土壤土著硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液、淋出液土著硫酸鹽還原菌菌群富集培養(yǎng)液中的至少一種，或者兩者以任意比例混合形成的混合物；所述硫酸鹽還原菌功能篩選培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：KH₂PO₄ 0.4-0.6份，NH₄Cl0.8-1.2份，MgSO₄·7H₂O 0.05-0.08份，Na₂SO₄2.5-4.5份，CaCl₂ 0.06-0.1份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O0.008-0.012份，檸檬酸鈉0.25-0.35份，乳酸鈉3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸餾水1000份，pH值6.2-6.5；

從土壤樣品中分離、富集土著脫氮菌的方法具體如下：按照200-500g:1L的比例，將采集來的土壤樣品與無菌水混合并恒溫振蕩培養(yǎng)，靜置取上清液，得到土壤樣品初始菌懸液；接著按照1:2-3的體積比，將土壤樣品初始菌懸液或采集來的淋出液樣品與脫氮富集培養(yǎng)基混合恒溫培養(yǎng)，得到第一次富集的脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液；按照1:3-4的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第一次富集的脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液與脫氮富集培養(yǎng)基混合再次進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，得到第二次富集的脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液；按照1:4-5的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第二次富集的脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液與脫氮富集培養(yǎng)基混合進(jìn)行第三次恒溫培養(yǎng)；重復(fù)上述培養(yǎng)過程3-5次，得到土壤土著脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液或淋出液土著脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液；脫氮富集培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：蛋白胨8-12份，NaCl 8-12份，酵母提取物3-7份，蒸餾水1000份，pH值7-7.5；

土著脫氮菌菌群的篩選方法具體如下：按照1:3-6的體積比，將土著脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液與脫氮功能篩選培養(yǎng)基混合恒溫培養(yǎng)，得到第一次篩選的土著脫氮菌菌群；按照1:4-8的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第一次篩選的土著脫氮菌菌群與脫氮功能篩選培養(yǎng)基混合恒溫培養(yǎng)，得到第二次篩選的土著脫氮菌菌群；按照1:5-10的體積比，在同樣的培養(yǎng)條件下將第二次篩選的土著脫氮菌菌群與脫氮功能篩選培養(yǎng)基混合恒溫培養(yǎng)；重復(fù)培養(yǎng)3-5次，得到土著脫氮菌菌群；所述土著脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液選自土壤土著脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液、淋出液土著脫氮菌菌群富集培養(yǎng)液中的至少一種，或者兩者以任意比例混合形成的混合物；所述脫氮功能篩選培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：葡萄糖或檸檬酸鈉5-20份，(NH₄)₂SO₄ 0.5-2份，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01-0.05份，MnSO₄·4H₂O0.01-0.04份，K₂HPO₄ 0.5-1.5份，蒸餾水1000份，pH為7-7.5；

步驟(b)預(yù)處理過程具體如下：將土著硫酸鹽還原菌菌群接種到硫酸鹽還原菌菌群培養(yǎng)基中進(jìn)行恒溫厭氧培養(yǎng)，待菌群生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期得到硫酸鹽還原菌菌群培養(yǎng)液；按照1:2-3:4-5的體積比，將制得的硫酸鹽還原菌菌群培養(yǎng)液、硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基、酸性稀土浸礦場(chǎng)地地殘留銨鹽淋出液混合均勻后進(jìn)行恒溫厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后固液分離，得到pH為7-8的預(yù)處理后的淋出液；所述硫酸鹽還原菌菌群培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：KH₂PO₄0.4-0.6份，NH₄Cl 0.8-1.2份，MgSO₄·7H₂O 0.05-0.08份，Na₂SO₄2.5-4.5份，CaCl₂ 0.06-0.1份，檸檬酸鈉0.25-0.35份，乳酸鈉3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸餾水1000份，pH值6.2-6.5；所述硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：KH₂PO₄ 0.4-0.6份，MgSO₄·7H₂O0.05-0.08份，檸檬酸鈉0.25-0.35份，乳酸鈉3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸餾水1000份，pH值6.2-6.5。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(c)具體過程如下：將土著脫氮菌菌群接種到脫氮微生物培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待菌群生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期得到脫氮菌菌群培養(yǎng)液；按照1:2-3:4-5的體積比，將脫氮菌菌群培養(yǎng)液、脫氮培養(yǎng)基、預(yù)處理后的淋出液混合均勻并恒溫培養(yǎng)即可；所述脫氮微生物培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：檸檬酸鈉3-6份，(NH₄)₂SO₄ 0.3-0.5份，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01-0.05份，MnSO₄·4H₂O0.01-0.04份，K₂HPO₄0.5-1.5份，蒸餾水1000份，pH為7-7.5；所述脫氮培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計(jì)的配方為：葡萄糖或檸檬酸鈉5-20份，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01-0.05份，MnSO₄·4H₂O 0.01-0.04份，K₂HPO₄ 0.5-1.5份，蒸餾水1000份，pH為7-7.5。