[發明專利]一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物及其制備方法

有效

• 申請號: 202010067560.4
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111228513B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 羅忠;薛臣成;李孟桓;侯彥華
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K31/704;A61K33/26;A61K47/02;A61K47/54;A61K47/60;A61P35/00;B82Y5/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

本發明涉及一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物及其制備方法，屬于醫藥技術領域。該復合納米藥物進入腫瘤細胞后，借助溶酶體的酸性環境促進納米顆粒的降解，同時通過樹狀大分子質子化作用將溶酶體透化釋放阿霉素和亞鐵離子，其中，亞鐵離子能夠促進細胞膜的多不飽和脂肪酸轉化為脂質過氧化物，誘導腫瘤細胞的鐵死亡，而DOX在誘導細胞凋亡的同時能夠促進氧化應激增加細胞內雙氧水的含量，從而進一步增強亞鐵離子引發的脂質過氧化導致鐵依賴性的鐵死亡。該復合納米顆粒不但能夠增加腫瘤治療效果，還能夠減少化療帶來的副作用。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物及其制備方法。

背景技術

目前，多功能的復合納米材料廣泛應用于腫瘤的診斷和治療，和傳統的化療相比，復合納米材料能夠有效積累到腫瘤組織，在腫瘤部位內、外環境刺激下釋放裝載的藥物增加腫瘤治療效果，同時能夠減少化療帶來的副作用。碳酸鈣作為一種可降解、無毒的生物材料具有廣泛的生物學應用，無定型的碳酸鈣具有載藥量高、形貌可控等特性，是很好的藥物遞送工具。

鐵死亡是2012年由Stockwell提出的鐵依賴的程序性細胞死亡形式，迅速成為全球的研究熱點。通過增加細胞內亞鐵離子的積累和GPX4的失活，能夠促進細胞內產生大量脂質過氧化物，促進鐵依賴性細胞死亡。傳統的腫瘤治療手段(如化療、放療)通常立足于誘導腫瘤細胞凋亡，但是癌細胞易發生基因突變，導致細胞凋亡途徑受阻。鐵死亡可以繞過腫瘤細胞凋亡阻力，更好地殺滅腫瘤細胞，尤其是耐藥性腫瘤細胞。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物的制備方法；目的之二在于提供一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物的制備方法，所述方法包括如下步驟：

(1)制備接枝葉酸的炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子

將葉酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入N,N-二甲基甲酰胺中，活化0.5-2h后再加入炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子，室溫下攪拌反應24h后透析，制得接枝葉酸的炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子；

(2)制備聚乙二醇單甲醚接枝基質金屬蛋白酶-2響應肽的炔基化二代酰胺-胺型樹枝狀高分子

首先將疊氮化聚乙二醇單甲醚、炔基化基質金屬蛋白酶-2響應肽、五水硫酸銅和抗壞血酸加入N,N-二甲基甲酰胺中，室溫下保護氣氛中攪拌反應24h后透析，制得聚乙二醇單甲醚接枝基質金屬蛋白酶-2響應肽；然后將所述聚乙二醇單甲醚接枝基質金屬蛋白酶-2響應肽溶于無水二氯甲烷中，加入二碳酸二叔丁酯、三乙胺后室溫下攪拌反應12-24h后透析，制得聚乙二醇單甲醚接枝叔丁基脂保護的基質金屬蛋白酶-2響應肽；最后將所述聚乙二醇單甲醚接枝叔丁基脂保護的基質金屬蛋白酶-2響應肽、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入N,N-二甲基甲酰胺中，活化0.5-2h后再加入炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子，室溫下攪拌反應24h后旋干，將產物溶于三氟乙酸溶液中，室溫下攪拌反應12-24h后透析，制得聚乙二醇單甲醚接枝基質金屬蛋白酶-2響應肽的炔基化二代酰胺-胺型樹枝狀高分子；

(3)制備載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒

將氯化鈣、阿霉素鹽酸溶液、無水氯化亞鐵加入無水乙醇中，混勻后置于帶有若干個出氣孔的容器中，然后置于裝有碳酸氫銨的干燥器中，室溫下反應2-3d后離心取沉淀，將所述沉淀洗滌后，制得載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒；

(4)制備表面修飾有硅層的載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒