[發(fā)明專利]一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010067560.4
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111228513B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設計）人: 羅忠;薛臣成;李孟桓;侯彥華
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K31/704;A61K33/26;A61K47/02;A61K47/54;A61K47/60;A61P35/00;B82Y5/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.一種具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)制備接枝葉酸的炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子

將葉酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入N,N-二甲基甲酰胺中，活化0.5-2h后再加入炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子，室溫下攪拌反應24h后透析，制得接枝葉酸的炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子；

(2)制備聚乙二醇單甲醚接枝基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽的炔基化二代酰胺-胺型樹枝狀高分子

首先將疊氮化聚乙二醇單甲醚、炔基化基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽、五水硫酸銅和抗壞血酸加入N,N-二甲基甲酰胺中，室溫下保護氣氛中攪拌反應24h后透析，制得聚乙二醇單甲醚接枝基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽；然后將所述聚乙二醇單甲醚接枝基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽溶于無水二氯甲烷中，加入二碳酸二叔丁酯、三乙胺后室溫下攪拌反應12-24h后透析，制得聚乙二醇單甲醚接枝叔丁基脂保護的基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽；最后將所述聚乙二醇單甲醚接枝叔丁基脂保護的基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入N,N-二甲基甲酰胺中，活化0.5-2h后再加入炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子，室溫下攪拌反應24h后旋干，將產(chǎn)物溶于三氟乙酸溶液中，室溫下攪拌反應12-24h后透析，制得聚乙二醇單甲醚接枝基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽的炔基化二代酰胺-胺型樹枝狀高分子；

(3)制備載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒

將氯化鈣、阿霉素鹽酸溶液、無水氯化亞鐵加入無水乙醇中，混勻后置于帶有若干個出氣孔的容器中，然后置于裝有碳酸氫銨的干燥器中，室溫下反應2-3d后離心取沉淀，將所述沉淀洗滌后，制得載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒；

(4)制備表面修飾有硅層的載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒

將步驟(3)中制備的載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒分散于無水乙醇中，然后加入乙二胺四乙酸、氨水，以400-800rpm的速度攪拌15min后加入正硅酸乙酯，繼續(xù)以400-800rpm的速度攪拌15min后再加入水，攪拌反應12-24h后離心取沉淀，將所述沉淀洗滌后，制得表面修飾有硅層的載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒；

(5)制備具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物

將步驟(4)中制備的表面修飾有硅層的載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒分散于無水甲苯中，然后加入3-氨丙基三甲氧基硅烷，60℃回流反應12-24h后離心取沉淀，將所述沉淀洗滌后，制得氨基化載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒；將所述氨基化載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒分散于無水乙醇中，再加入疊氮聚乙二醇對甲苯磺酰，45℃下攪拌反應12h后離心取沉淀，將所述沉淀洗滌后，制得疊氮化聚乙二醇修飾的載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒；將所述疊氮化聚乙二醇修飾的載阿霉素、二價鐵離子的無定型碳酸鈣復合納米顆粒、步驟(2)中制備的聚乙二醇單甲醚接枝基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽的炔基化二代酰胺-胺型樹枝狀高分子，步驟(1)中制備的接枝葉酸的炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子、五水硫酸銅和抗壞血酸加入N,N-二甲基甲酰胺中，室溫下保護氣氛中攪拌反應24h后離心取沉淀，將所述沉淀洗滌后，制得具有誘導腫瘤細胞鐵死亡效應的無定型碳酸鈣復合納米藥物。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述葉酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺、N,N-二甲基甲酰胺和炔基化二代聚酰胺-胺型樹枝狀高分子的質(zhì)量體積比為60:80:47:25:100，所述質(zhì)量體積比的單位為mg:mg:mg:mL:mg。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述疊氮化聚乙二醇單甲醚、炔基化基質(zhì)金屬蛋白酶-2響應肽、五水硫酸銅、抗壞血酸和N,N-二甲基甲酰胺的質(zhì)量體積比為250:47:15:30:50，所述質(zhì)量體積比的單位為mg:mg:mg:mg:mL。