[發(fā)明專利]一種提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)微生物總RNA和總蛋白的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010064013.0 | 申請日： | 2020-01-20 |
| 公開（公告）號： | CN111254139A | 公開（公告）日： | 2020-06-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李侃;任鑫坤;張徐祥;王慶;任洪強(qiáng) | 申請（專利權(quán)）人： | 南京大學(xué);南京大學(xué)宜興環(huán)保研究院 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C07K1/14;C12N1/06 |
| 代理公司： | 江蘇瑞途律師事務(wù)所 32346 | 代理人： | 陳彬;蔣海軍 |
| 地址： | 210093 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 提取 酸性 條件下 基質(zhì) 微生物 rna 蛋白 方法 | ||
1.一種提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：包括以下步驟：
1)取基質(zhì)材料，采用pH＝3.6～5.5的緩沖溶液A在一定壓力的水壓下沖洗基質(zhì)材料，將微生物從附著基質(zhì)表面上洗脫，離心收集菌體；
2)將步驟1)收集的菌體裂解，采用溶液B提取總RNA和總蛋白，所述溶液B為pH＝4.0～4.5的Trizol試劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述步驟1)中水壓壓力范圍為30～120MPa。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和/總蛋白的方法，其特征在于：所述步驟1)中緩沖溶液A的沖洗體積為10～100mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述方法還包括總RNA和總蛋白的純化步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述的緩沖溶液A為醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，摩爾濃度為0.1～0.2mol/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述菌體裂解方法包括凍融法、超聲法或液氮研磨法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述溶液B中含有摩爾濃度為0.05～0.2mol/L的醋酸-醋酸鈉。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述步驟1)中緩沖溶液A的沖洗體積為80mL，水壓的壓力為80MPa。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述步驟1)離心速度為5000g，離心時間2分鐘，離心溫度4℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的提取強(qiáng)酸性條件下基質(zhì)附著微生物總RNA和總蛋白的方法，其特征在于：所述基質(zhì)表面包括基質(zhì)材料外表面和/或內(nèi)表面。
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