[發明專利]檢測肝癌、肝炎和/或肝硬化的試劑盒及在AKR1B10和AFP聯合定量測定中應用

在審

• 申請號: 202010062548.4
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111239410A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 曹哲;陳志勇;祝躍球
• 申請（專利權）人: 湖南萊拓福生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/576;G01N33/574;G01N33/573
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所(普通合伙) 11039
• 代理人: 劉江良

本發明屬于醫藥生物技術領域，公開了一種用時間分辨熒光免疫分析法同時檢測醛酮還原酶1B10和甲胎蛋白含量的測定試劑盒，可用于肝癌、肝炎、肝硬化等疾病的篩查、診斷、療效判斷、預后評估或復發監測。所述試劑盒包括：酶標板、校準品、銪標記AKR1B10檢測抗體、鋱標記AFP檢測抗體和增強液。待測血清中AKR1B10和AFP分別與酶標板的AKR1B10和AFP包被抗體結合，再加入兩種檢測抗體，形成雙抗體夾心復合物，加入增強液解離復合物上的銪離子和鋱離子，分別在340nm和295nm波長發出高強度熒光。其熒光強度與樣本中的AKR1B10和AFP濃度成正比。采用本試劑盒可以同時檢測兩種標志物的含量，極大的提升了檢測的靈敏度和特異性。

技術領域

本發明涉及醫藥生物技術領域，具體地說，涉及了一種用時間分辨熒光免疫分析法共同檢測醛酮還原酶1B10（AKR1B10）和甲胎蛋白（AFP）含量的試劑盒，其可用于肝癌、肝炎、肝硬化和其他肝臟疾病的篩查、診斷、療效判斷、預后評估或復發監測。

背景技術

甲胎蛋白（α-fetoprotein, αFP或AFP）是一種相對分子質量約68kDa的癌胚糖蛋白，由胎兒肝臟和卵黃囊合成。成人中，AFP由肝細胞產生，其血清中含量極微，但當肝細胞發生癌變時，卻又恢復了產生AFP的功能，而且隨著病情的惡化，AFP在血清中的含量會急劇增加。檢測血清AFP水平對早期診斷原發性肝癌具有極高的臨床價值，所以AFP長期升高被視為原發性肝癌的特異性指標。然而并非所有肝癌患者的肝細胞都分泌AFP，仍有30%~40%左右的患者AFP呈陰性或低濃度，具有明顯的局限性。因而早期診斷還需要其他肝癌輔助診斷手段。

醛酮還原酶1B10（Aldo-keto Reductase 1B10，AKR1B10）基因定位在染色體7q33，編碼一個由316個氨基酸組成的蛋白，即AKR1B10蛋白，分子量為36.02kDa。AKR1B10蛋白可由溶酶體介導的非經典分泌途徑，從腫瘤細胞中分泌進入血液循環。其功能主要為保護細胞免于羧基毒性損傷；以及穩定乙酰輔酶A羧化酶α（ACCα）阻止ACCα降解，從而調節脂肪酸與脂質合成，促進腫瘤細胞的生長增殖和遷移。相關研究表明，AKR1B10在人類原發性肝癌組織中高表達，是一種新型的肝癌血清標志物。

近期發表于Hepatology（2019, 69(6):2489-2501. doi: 10.1002/hep.30519.Epub 2019 Apr 6）的文章報導，從三家醫院入組1244名受試者，包括肝癌患者（HCC）、健康對照者（HC）和肝臟良性腫瘤患者（BLT）、慢性乙型肝炎患者（CHB）和肝硬化患者（LC），分成探索性發現隊列（203名）、訓練隊列（519名）和驗證隊列（522名）。從三個隊列比較分析了AKR1B10和AFP蛋白的檢測情況，結果顯示：AKR1B10的檢測靈敏度為72.7%，AFP的靈敏度為65.1%，而當兩種指標共同檢測，其靈敏度可以達到87.5%。有522名參與者的驗證隊列證實了這一結果。因此，聯合AKR1B10和AFP能提高對HCC的檢出率和準確性，具有更加廣闊的臨床診斷價值。

發明內容

針對上述問題，本發明人開發了一種檢測腫瘤特異性標志物醛酮還原酶1B10（AKR1B10）和甲胎蛋白（AFP）聯合測定試劑盒（時間分辨免疫熒光分析法）。該試劑盒將銪離子（Eu³⁺）和鋱離子（Tb³⁺）分別藕聯于AKR1B10抗體和AFP抗體，通過利用兩種離子的不同激發光波長，在同一反應中同時檢測AKR1B10和AFP兩種不同蛋白。本試劑盒可用于受試者血清、尿液、乳汁、腸液、大便或組織樣本中的AKR1B10和AFP蛋白的檢測，采用本試劑盒可以同時檢測兩種標志物含量，極大的提升了檢測的靈敏度和特異性。

具體而言，本發明涉及如下內容：

本發明提供一種用于檢測肝癌、肝炎和/或肝硬化的試劑盒，其特征在于，其包括銪標記的醛酮還原酶1B10檢測抗體和鋱標記的甲胎蛋白檢測抗體。