[發(fā)明專利]抗炎五肽及其提取分離方法和在改善記憶中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010057388.4
• 申請(qǐng)日: 2020-01-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111153963B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙謀明;王曙光;蘇國(guó)萬(wàn);鄭淋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué);廣州現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/06
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C12P21/06;A61K38/08;A61P25/28;A61P25/00;A23L33/18
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿

本發(fā)明公開(kāi)了一種抗炎五肽及其提取分離方法和在改善記憶中的應(yīng)用，該抗炎五肽的氨基酸序列為Ala?Pro?Thr?Leu?Trp，其提取分離方法包括以下步驟：堿溶酸沉從核桃粕中提取核桃蛋白，取核桃蛋白，加去離子水混合，酶解，取上清液，得到核桃蛋白酶解液；使用3kDa分子量超濾膜收集透過(guò)液；核桃蛋白酶解液的低分子量組分上樣凝膠過(guò)濾色譜柱，用去離子水洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，收集合并成多個(gè)洗脫峰組分，選擇抗炎活性較強(qiáng)的組分做質(zhì)譜檢測(cè)，證實(shí)含有本發(fā)明的抗炎五肽。本發(fā)明的抗炎五肽對(duì)LPS刺激的BV?2細(xì)胞炎癥反應(yīng)具有較好的抑制活性，可用于制備改善記憶類(lèi)藥物或改善記憶類(lèi)保健品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于活性肽領(lǐng)域，具體涉及一種抗炎五肽及其提取分離方法和在改善記憶中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的常駐巨噬細(xì)胞，在先天免疫調(diào)節(jié)和神經(jīng)元穩(wěn)態(tài)中起關(guān)鍵作用。但在大腦神經(jīng)炎癥狀態(tài)下，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)促炎介質(zhì)的釋放，包括一氧化氮(NO)，前列腺素E₂(PGE₂)和促炎細(xì)胞因子，例如白介素-1β(IL-1β)，白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等。它們?cè)谏窠?jīng)退行性疾病中起關(guān)鍵作用。作為主要的細(xì)胞因子，IL-1β在控制先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中具有重要作用。它可以增強(qiáng)其他促炎細(xì)胞因子如TNF-a和IL-6的表達(dá)。IL-1β的過(guò)量產(chǎn)生還刺激小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生和釋放活性氧(ROS)，同時(shí)，ROS通過(guò)激活NF-κB途徑誘導(dǎo)促炎基因的表達(dá)。激活的促炎性轉(zhuǎn)錄因子可增強(qiáng)細(xì)胞因子和趨化因子的形成，從而加速炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生和發(fā)展。反之，該過(guò)程又會(huì)產(chǎn)生更多的ROS。這種惡性循環(huán)通過(guò)介導(dǎo)線粒體功能障礙，加劇細(xì)胞損傷并最終對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生有害影響。這表明氧化應(yīng)激在神經(jīng)炎癥發(fā)展中的重要作用。

BV-2是一種永生化的小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，由于其激活后可持續(xù)、穩(wěn)定和過(guò)量地產(chǎn)生炎性因子，因此被廣泛應(yīng)用于研究炎癥相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病。脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的主要成分，可通過(guò)介導(dǎo)多種細(xì)胞反應(yīng)促進(jìn)炎癥因子的釋放，通常用于在體內(nèi)外誘導(dǎo)炎癥的發(fā)生。

研究表明可通過(guò)在小鼠腹膜內(nèi)注射LPS從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)進(jìn)程來(lái)造成學(xué)習(xí)和記憶功能障礙模型。此外，越來(lái)越多的研究報(bào)道了氧化應(yīng)激在炎癥反應(yīng)發(fā)展中的作用。ROS的產(chǎn)生會(huì)增加BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞中炎癥介質(zhì)的表達(dá)，從而加速神經(jīng)元損傷和死亡。據(jù)報(bào)道，小膠質(zhì)細(xì)胞中ROS的過(guò)量產(chǎn)生可引起炎癥并導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷。作為細(xì)胞中ROS的主要來(lái)源，線粒體的功能變化也參與其中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于提供一種抗炎五肽。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述抗炎五肽的提取分離方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述抗炎五肽的用途。

本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種五肽，其氨基酸序列為Ala-Pro-Thr-Leu-Trp(APTLW)。

上述五肽可以采用現(xiàn)有技術(shù)化學(xué)合成。例如通過(guò)固相合成儀合成本發(fā)明五肽，將二氯樹(shù)脂溶脹、洗滌，脫除Fmoc保護(hù)基后加入氨基酸進(jìn)行縮合反應(yīng)，重復(fù)脫除-保護(hù)-縮合的過(guò)程直至所有氨基酸連接完畢。

此外本發(fā)明的抗炎五肽也可采用超濾和葡聚糖凝膠色譜等分離手段從核桃蛋白酶解液中分離獲得，具體地包括以下步驟：

(1)采用堿溶酸沉的方法從核桃粕中提取核桃蛋白，具體流程如下，核桃粕打粉后加水溶解(物料比為1:12)，溶液調(diào)pH值至8.0-9.0，攪拌2-3h，離心(8000-10000rpm，10-15min，4℃)，取上清液調(diào)pH值至4.0-5.0，再攪拌2-3h，再次離心(8000-10000rpm，10-15min，4℃)，將沉淀溶解，透析脫鹽2d(渣與水1:5)以上，真空干燥得到核桃蛋白粉；