[發明專利]檢測SLCO1B1和APOE基因多態性的引物及探針組合物、試劑盒、方法

在審

• 申請號: 202010052063.7
• 申請日: 2020-01-17
• 公開（公告）號: CN111154860A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 劉福平;劉晶晶;鄭建權
• 申請（專利權）人: 深圳會眾生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務所 44275
• 代理人: 湯星星

本發明涉及檢測SLCO1B1和APOE基因多態性的引物及探針組合物、試劑盒、方法，該檢測SLCO1B1和APOE基因多態性的引物及探針組合物包括：用于檢測SLCO1B1位點的第一引物和第一探針；以及，用于檢測APOE位點的第二引物和第二探針；其中，第一引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1?4所示，第一探針的核苷酸序列如SEQ ID No.9?10所示；第二引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5?8所示，第二探針的核苷酸序列如SEQ ID No.11?12所示。本發明具有檢測通量高以及操作簡便的優點。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術，特別涉及一種檢測SLCO1B1和APOE基因多態 性的引物及探針組合物、試劑盒、方法。

背景技術

根據我國流行病學調查，中國成人血脂異常總體患病率在2012年高達 40.4％，較10年前呈大幅度上升，而血清總膽固醇(TC)水平的升高將導致未來 中國心血管病事件增加約920萬。低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)或TC升高為特 點的血脂異常是動脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)重要的危險因素，因此降 低LDL-C水平，可顯著減少ASCVD的發病及死亡危險。LDL-C每降低 1mmol/L(38mg/dL)，患主要心血管事件的風險可降低20％，全因死亡率可降低 10％，而非心血管事件引起的死亡率并未增加。

他汀類藥物又稱為3-羥甲基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMGCo A)還原酶抑制 劑，近20多年來的眾多大規模臨床試驗結果顯示，他汀類藥物在ASCVD一級 和二級預防中均能顯著降低心血管事件風險，是防治此類疾病最為重要的藥物。 然而不同的他汀在化學結構上雖有相似之處，但它們在藥代動力學(吸收、結合 血漿蛋白、代謝和溶解度)與其他藥物相互作用、藥物療效以及他汀導致的不良 反應方面存在個體間的差異，而這些差異部分是歸因于常見藥物基因的遺傳與 變異，SLCO1B1、APOE和ABCB1基因則是近年來研究最多的熱點基因。

有機陰離子轉運多肽1B1(OATP1B1，又稱OATP-C、OATP2或LST1)特 異地表達在肝細胞基底膜上，在肝細胞攝取和清除內源性和外源性物質如膽汁 酸、非結合型膽紅素、甲狀腺素、他汀類藥物、瑞格列奈和伊立替康活性代謝 產物SN-38等中發揮重要作用。OATP1B1由SLCO1B1基因編碼，該基因具有 遺傳多態性，其中388AC和521TC是亞洲人群中的主要遺傳變異，等位基因 頻率為10～15％。突變型可顯著降低OATP1B1對其底物的攝取能力，使他汀類 藥物如普伐他汀、阿托伐他汀和羅蘇伐他汀等的血藥濃度升高，增加橫紋肌溶 解癥或肌病的發生風險。為降低他汀類藥物嚴重不良反應的發生風險，建議臨 床上根據SLCO1B1基因型選擇他汀類藥物進行治療。

載脂蛋白E(Apolipoprotein E，APOE)是一種存在于乳糜微粒和中間密度 脂蛋白中的載脂蛋白，主要由肝臟和巨噬細胞產生，參與血脂的運輸、存儲和 排泄。人類APOE基因位于19號染色體19q13.2。該基因的兩個功能性SNP rs429358(c.388TC，Cys130Arg)和rs7412(c.526CT，Arg176Cys)構成3 種單倍型，分別是E2(rs429358T-rs7412T)、E3(rs429358T-rs7412C)、E4 (rs429358C-rs7412C)。由三種單倍型構成6種不同的基因型(E2/E2、E3/E3、 E4/E4、E2/E3、E2/E4和E3/E4)。E3/E3是最常見的基因型，人群中的頻率約60％。目前FDA已將APOE2列為普伐他汀藥物反應相關的生物標記。基因型 為APOE E2/E2的高血脂癥患者普伐他汀的降脂療效更好。

用于檢測的方法包括PCR-直接測序法、PCR-基因芯片法和熒光定量PCR 法等多種方法，每種方法的原理和優缺點如下：