[發(fā)明專利]一種固相萃取柱用于水中MC-RR的富集、純化方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010050381.X | 申請日： | 2020-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN111208228A | 公開（公告）日： | 2020-05-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 孟元華;龔燕;徐志飛;周小新;劉文衛(wèi);孔令燦;吳宇伉 | 申請（專利權(quán)）人： | 無錫市疾病預(yù)防控制中心 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/08;B01D15/26;B01J20/20;B01J20/30 |
| 代理公司： | 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429 | 代理人： | 趙海波 |
| 地址： | 214000 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 萃取 用于 水中 mc rr 富集 純化 方法 | ||
本發(fā)明涉及一種固相萃取柱用于水中MC?RR的富集、純化方法，所述方法包括以下步驟：步驟一、步驟一、將固相萃取柱用5ml純水、5ml甲醇和5ml pH＝4乙酸水溶液進行純化；步驟二、取20ml含MC?RR的水樣，用乙酸調(diào)節(jié)至pH＝1?12，以1ml/min通過純化后的固相萃取柱富集；步驟三、使用95％甲醇+5％pH＝10氨水溶液的混合液5ml洗脫，洗脫液經(jīng)氮氣吹干，用0.5ml甲醇溶解，供LC?MS/MS檢測。本發(fā)明一種固相萃取柱用于水中MC?RR的富集、純化方法，其使用的固相萃取柱容量更大、抗干擾能力更強，且可重復使用，有效保證了最終的富集、純化效果，降低了成本。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種固相萃取柱用于水中MC-RR的富集、純化方法，可用于水中微囊藻毒素-RR的富集，屬于化學檢測前處理技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
生物炭是生物質(zhì)在缺氧條件下熱裂解產(chǎn)生的一種富碳產(chǎn)物，因其具有豐富的微孔結(jié)構(gòu)和含氧官能團以及很大的比表面積，使其具有較強的吸附能力。近年來，生物炭在土壤修復、水環(huán)境中有機物污染的治理有著廣泛的應(yīng)用前景。菠蘿肉具有酸性特征、以及獨特孔徑結(jié)構(gòu)，將其制作生物炭，更能發(fā)揮生物炭的優(yōu)勢。
微囊藻毒素(MC)具有肝毒性，是三大致肝癌因素之一。微囊藻毒素為環(huán)狀七肽，現(xiàn)已報道有70種多種結(jié)構(gòu)變異體，其中毒性較大、含量相對較多的幾種為：MC-LR、MC-RR和MC-YR。MC-LR毒性最大，關(guān)注最多。但在太湖藍藻水華中MC-RR的含量最大，產(chǎn)生的危害可能比MC-LR更大。而國內(nèi)還未將MC-RR作為監(jiān)測指標，且也未有限量值。目前MC-RR的檢測以HPLC-MS、HPLC法為主。但由于水環(huán)境中MC-RR含量低，故需要純化富集。相對于傳統(tǒng)C18等填料，生物炭由于其特殊物理化學結(jié)構(gòu)，使其具有更大的吸附能力以及耐酸堿性，且經(jīng)過特殊處理后還可以重復使用。目前，未有將生物炭用于制備固相萃取柱的研究報道。因此使用菠蘿肉生物炭制備一種用于水中微囊藻毒素-RR富集固相萃取柱，相對于傳統(tǒng)固相萃取柱柱容量更大、抗干擾能力更強，且可重復使用，對于太湖水中MC-RR污染的監(jiān)測以及水體修復有著積極的意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對上述現(xiàn)有技術(shù)提供一種固相萃取柱用于水中MC-RR的富集、純化方法，其使用的固相萃取柱容量更大、抗干擾能力更強，且可重復使用，有效保證了最終的富集、純化效果，降低了成本。
本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案為：一種固相萃取柱用于水中MC-RR的富集、純化方法，所述方法包括以下步驟：
步驟一、步驟一、將固相萃取柱用5ml純水、5ml甲醇和5ml pH＝4乙酸水溶液進行純化；
步驟二、取20ml含MC-RR的水樣，用乙酸調(diào)節(jié)至pH＝1-12，以1ml/min通過純化后的固相萃取柱富集；
步驟三、使用95％甲醇+5％pH＝10氨水溶液的混合液5ml洗脫，洗脫液經(jīng)氮氣吹干，用0.5ml甲醇溶解，供LC-MS/MS檢測。
優(yōu)選的，所述固相萃取柱包括柱體，柱體內(nèi)設(shè)置有上篩板和下篩板，上篩板和下篩板之間設(shè)置有菠蘿肉基質(zhì)生物炭填料。
優(yōu)選的，所述菠蘿肉基質(zhì)生物炭填料制備方法如下：
將菠蘿洗凈后去皮切碎，取500g碎菠蘿肉于剛玉坩堝中置于氬氣保護下的馬弗爐中，先95℃烘烤3h，除去水分；然后，繼續(xù)在氬氣保護下將馬弗爐以55℃/min升溫至650℃，保持4h，冷卻后，用5％乙酸浸泡24h改性菠蘿肉生物炭，洗滌至中性，烘干，過100目網(wǎng)曬，即制成菠蘿肉生物炭填料。
優(yōu)選的，在柱管底部設(shè)置下篩板，將5g菠蘿肉生物炭填料填充在固相萃取柱柱管中，振蕩固相萃取柱柱管，使菠蘿肉生物炭均勻分散后壓實，然后將上篩板固定固相萃取柱填料上方，即制得菠蘿肉基質(zhì)生物炭填料固相萃取柱。
優(yōu)選的，步驟二中MC-RR的水樣，用乙酸調(diào)節(jié)至pH＝4。
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