[發明專利]彈狀病毒敏感的黃鱔腎組織細胞系及應用

有效

• 申請號: 202010048530.9
• 申請日: 2020-01-16
• 公開（公告）號: CN112126619B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 劉文枝;曾令兵;范玉頂;周勇;江南;李逸群;孟彥;薛明洋
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/00;C12Q1/02;C12Q1/70;C12Q1/686;A61K39/205;A61P31/14;C12R1/91
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于水生生物細胞領域和水產養殖病害防控技術領域，公開了彈狀病毒敏感的黃鱔腎組織細胞系及應用，本發明的細胞系保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCC NO：C2019286。該黃鱔腎組織細胞系（CrE?K）生長狀態良好，對目前新發現和分離鑒定的CrERV敏感；CrERV在CrE?K細胞上連續傳代至第16代仍可檢測到病毒核酸且細胞病變穩定；將出現病變效應的細胞做超薄電鏡切片，可在CrE?K細胞中觀察到大量CrERV成熟病毒粒子及其復制過程。本發明所構建的黃鱔腎組織細胞系的構建方法重復性強，條件科學合理，適用于體外培養彈狀病毒，為彈狀病毒的分離、檢測、培養及其完整的生物學特性研究提供了技術平臺。

技術領域

本發明屬于水生生物細胞領域和水產養殖病害防控技術領域，具體涉及彈狀病毒敏感的黃鱔腎組織細胞系及應用。

背景技術

彈狀病毒科(Rhabdoviridae)病毒是一類具有廣泛宿主的負鏈RNA病毒，其顆粒呈現子彈狀或棒狀。其中狂犬病病毒(Rabies virus)最為人熟知，能引起人或其他溫血動物的狂犬病，病死率幾乎為100％，引起了世界范圍的廣泛關注，造成社會對養殖寵物安全度的恐慌。因此，對彈狀病毒進行深入研究具有重要意義。此外，彈狀病毒還能引起家畜多種急性傳染病(如牛流行熱，ephemeral fever)，以及魚類和多種農作物的感染性疾病。國際病毒分類委員會(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2017年發表了最新的病毒分類第十次報告，將彈狀病毒科(Rhabdoviridae)劃分為18個屬，其中能夠感染魚類的彈狀病毒有Perhabdovirus,Sprivivirus和Novirhabdovirus三個屬。目前以上三個屬能夠感染多種養殖魚類，具有強烈的致病性，死亡率可以達到100％，給全球的海淡水養殖業造成重大的經濟損失，尤其根據《進出口活水生動物檢驗檢疫協議》，進出境的養殖魚類，例如鱸魚、鯉魚、虹鱒、鯽魚、牙鲆等養殖和種苗用魚種，均要進行彈狀病毒(IHNV、SVC V、HIRRV)疫病檢測，口岸安全意義重大，影響進出口經濟貿易。

細胞培養分離技術是最準確的病毒病診斷方法，通常是世界動物衛生組織(OIE)推薦的魚類病毒檢測的首選方法。已有的研究發現黃鱔彈狀病毒(CrERV)在魚類病毒分離常用的細胞系中進行連續傳代增殖，病毒增殖滴度不高(Liu et al,.Isolation,identification and classification of a novel rhabdovirus from diseasedChinese rice-field eel,Monopterus albus.Archives of Virology(2019)164:105–116.)，包括對其它魚類彈狀病毒敏感的細胞系：鯉魚上皮瘤細胞(epithelioma popuasumcuprini,EPC)、鮭魚胚胎細胞(chinook salmon embryo,CHSE-214)、虹鱒魚性腺細胞(rainbow trout gonad,RTG-2)和草魚性腺細胞(Cteno pharyngodon idellus，GCO)均對CrERV增殖滴度不高，僅異育銀鯽腦細胞(Gibel carp,GiCB)能產生明顯細胞病變效應(CPE)，但病毒在CiCB細胞上傳至第10代后，病毒的增殖滴度逐漸下降，直至CPE現象消失。由于缺乏CrERV連續傳代敏感的細胞系，限制了對CrERV的研究，因此建立對CrERV敏感的細胞系并研究該細胞系的生物學特性，對CrERV進行連續傳代擴大培養從而深入研究病毒的特性，具有重要的意義。

本發明建立了用于分離培養彈狀病毒的敏感細胞系CrE-K，該細胞系的應用還包括但不局限于：分子細胞水平上開展彈狀病毒及其他魚類病毒理化特性、形態發生、病毒感染途徑、感染機理；制備、篩選或評價魚類抗病毒藥物。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種彈狀病毒敏感的黃鱔腎組織細胞系。該細胞系可用于分離，檢測，分離培養彈狀病毒。該細胞系已于2019年11月1日送往中國典型培養物保藏中心進行保藏，分類命名：黃鱔腎臟細胞系CrE-K，保藏編號：CCTCC NO：C2019286，地址：中國武漢武漢大學。