[發(fā)明專利]一種基于折疊無紡聚酯纖維帶材的腫瘤細胞三維培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010044304.3
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111235111B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設計）人: 陳觀平;李靜;應栩華
• 申請（專利權）人: 浙江省立同德醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

本發(fā)明提供了一種基于折疊無紡聚酯纖維帶材的腫瘤細胞三維培養(yǎng)方法，具體步驟包括在培養(yǎng)皿中放入支架，加入磷酸緩沖鹽溶液洗滌支架后滅菌，加入培養(yǎng)基；接入待實驗細胞進行培養(yǎng)；所述的支架為經(jīng)過2次風琴折的無紡聚酯纖維帶材，帶材的短邊與長邊的長度比為1:4.5～6，長邊為z字形折線；折疊形成的折痕與無紡聚酯纖維帶材的短邊平行并與z字形折線的頂點相交；折疊形成的相鄰折面之間的面夾角為165～170°。該方法制作簡單，能形成很好的空間結構，利于細胞的繁殖擴增。并且能模擬體內腫瘤微環(huán)境。本發(fā)明還提供了上述腫瘤細胞三維培養(yǎng)方法在藥物篩選中的應用，能模擬與體內基本一致的腫瘤組織生長微環(huán)境。

技術領域

本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)領域，具體涉及一種基于折疊無紡聚酯纖維帶材的腫瘤細胞三維培養(yǎng)方法。

背景技術

腫瘤生物學的研究在體外多采用二維單層細胞培養(yǎng)技術，體內則主要采用實驗動物模型。二維細胞培養(yǎng)通常為細胞生長在單層二維的塑料平面上，細胞具有較好的伸展性，培養(yǎng)技術較成熟，具有操作簡便、經(jīng)濟、觀察指標直觀和培養(yǎng)條件可控等優(yōu)點。

然而，研究表明，體內腫瘤微環(huán)境在腫瘤細胞的增殖、分化、轉移和耐藥等方面有重要作用。在細胞的二維培養(yǎng)體系中，腫瘤細胞在培養(yǎng)板表面呈單層貼壁生長，約50％的表面積粘附在細胞培養(yǎng)板上，與體內腫瘤相比，二維培養(yǎng)體系中的腫瘤細胞很少與其他細胞或基質接觸，缺乏體內腫瘤微環(huán)境下腫瘤細胞相互之間、腫瘤細胞與腫瘤微環(huán)境之間的動態(tài)相互作用，因此，其不能充分真實模擬腫瘤細胞在體內的生長模式，最終影響細胞增殖、分化、凋亡、基因和蛋白表達等過程，限制了二維細胞培養(yǎng)技術在腫瘤生物學中的應用。

三維細胞培養(yǎng)技術是利用各種方法及材料使細胞呈空間立體方式生長，更接近于體內生長模式，形成類似體內組織的結構，發(fā)揮其功能。與傳統(tǒng)的二維單層細胞相比，能夠更真實地模擬實體瘤的生理狀態(tài)及微環(huán)境，可以基于類組織水平、細胞水平、亞胞水平全面評價藥物，彌補了體內外研究的不足。

常用的材料支架包括細胞外基質、高分子聚合材料、有機材料復合物。公開號為CN106676074A的中國發(fā)明專利申請公開了一種誘導肝癌細胞向肝癌干細胞轉化的方法，將獲得單細胞狀態(tài)的人肝癌細胞，加入培養(yǎng)基中，制成細胞懸液；將細胞懸液滴加到多孔纖維素支架上，待細胞懸液滲入到多孔纖維素支架內部，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)貼附，然后再加入培養(yǎng)基置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)日，得到三維培養(yǎng)細胞。

然而，體外三維培養(yǎng)目前沒有共識哪種方法是最好，其關鍵在于材料支架、培養(yǎng)體系及如何更好地模擬腫瘤內環(huán)境(腫瘤細胞三維培養(yǎng)支架、血管及細胞間的相互作用[J].中國組織工程研究,2013,17(42):7442-7448.)。因此，亟需開發(fā)一種既能模擬體內腫瘤微環(huán)境又簡單易行的操作方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種腫瘤細胞三維培養(yǎng)方法，利用經(jīng)過風琴折法折疊的無紡聚酯纖維作為腫瘤細胞生長的支架，制作簡單，能形成很好的空間結構，并且能模擬體內腫瘤微環(huán)境。

本發(fā)明解決上述技術問題所提供的技術方案為：

一種腫瘤細胞三維培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

(1)在培養(yǎng)皿中逐個放入支架，磷酸緩沖鹽溶液洗滌支架后滅菌，加入培養(yǎng)基；

(2)接入待實驗腫瘤細胞進行培養(yǎng)；

所述的支架為經(jīng)過折疊的無紡聚酯纖維帶材；所述的無紡聚酯纖維帶材的短邊與長邊的長度比為1:4.5～6，所述的長邊為z字形折線；所述的折疊為風琴折；折疊形成的折痕與無紡聚酯纖維帶材的短邊平行并且與z字形折線的頂點相交；折疊形成的相鄰折面之間的面夾角為165～170°。

所述的無紡聚酯纖維帶材為由兩條長邊和兩條短邊組成的平面結構。

優(yōu)選地，所述的長邊的z字形折線的每條線段的長度相等。

優(yōu)選地，所述的折痕與短邊的長度相等。