[發明專利]蛋白質標記用化合物、蛋白質標記用試劑盒以及蛋白質定點標記方法

有效

• 申請號: 202010044197.4
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN113121384B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 楊志偉;劉錚
• 申請（專利權）人: 蘇州易萊生物技術有限公司
• 主分類號: C07C247/04
• 分類號: C07C247/04;C07K1/13;G01N21/64;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 北京萬景律師事務所 11993
• 代理人: 張士茜

1.蛋白質標記用化合物，其特征在于，具有式I所示結構：

其中，

M1和M2相同或者不同，選自Cl、Br、I中的一種，

N選自疊氮基，

X為NH，

Y為-(CH₂)_n-，n＝1-10，q為1，

L為聚合度為2-10的聚乙二醇鏈段，p為0或1。

2.根據權利要求1所述的蛋白質標記用化合物，其特征在于，M1和M2為Br。

3.根據權利要求1所述的蛋白質標記用化合物，其特征在于，所述蛋白質標記用化合物選自式II或式III所示化合物：

4.根據權利要求1所述的蛋白質標記用化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a-i、將丙烯酰氯和式IV所示化合物、催化劑加入到置于冰水浴的第一有機溶劑中，室溫下攪拌反應，得到酰胺基疊氮基中間體；

式IV中，Y為-(CH₂)_n-，n＝1-10；L存在或不存在、為聚合度為2-10的聚乙二醇鏈段；T選自氨基；N為疊氮基；q為1；p為0或1；

a-ii、將所述酰胺基疊氮基中間體加入到第二有機溶劑中，滴加液溴，室溫下攪拌直至反應完全，得到所述蛋白質標記用化合物，

所述催化劑選自三乙胺、乙二胺或吡啶中的至少一種；

所述第一有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、氯仿、二甲亞砜或二甲基甲酰胺中的至少一種；

所述第二有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、氯仿、二甲亞砜或二甲基甲酰胺中的至少一種。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述催化劑為三乙胺；所述第一有機溶劑為二氯甲烷；所述第二有機溶劑為三氯甲烷。

6.一種蛋白質標記用試劑盒，其特征在于，包括：

權利要求1-3任一項所述的蛋白質標記用化合物，

通過與N基團發生點擊化學的對應基團改性的標記物，

所述式I所示的化合物和所述改性的標記物獨立包裝，

所述N基團為蛋白質標記用化合物的疊氮基團；

所述改性的標記物為炔丙基酰胺羅丹明染料，其結構式為：

或

所述改性的標記物為三聯吡啶釕甲酰炔丙胺，其結構式為：

7.蛋白質的標記方法，其特征在于，包括以下步驟：

b-i、對待標記蛋白質的二硫鍵進行還原，以生成巰基，得到還原的蛋白質；

b-ii、將所述還原的蛋白質與權利要求1-3任一項所述的蛋白質標記用化合物反應，得到含有疊氮基的蛋白質；

b-iii、將所述含有疊氮基的蛋白質與對應地含有炔基的改性的標記物反應，得到標記的蛋白質，

所述改性的標記物為炔丙基酰胺羅丹明染料，其結構式為：

或所述改性的標記物為三聯吡啶釕甲酰炔丙胺，其結構式為：