[發(fā)明專利]一種以酵母絮凝蛋白為配基的親和吸附劑及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010042309.2 | 申請日： | 2020-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN111167418B | 公開（公告）日： | 2021-05-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 蔡國林;謝瑩;陸健;李曉敏;吳殿輝 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | B01J20/24 | 分類號： | B01J20/24;B01J20/30;C12N15/31;C12P21/00;B01D15/38 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇鈺瑩 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 酵母 絮凝 蛋白 親和 吸附劑 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明公開了一種以酵母絮凝蛋白為配基的親和吸附劑及應(yīng)用，屬于生物化工領(lǐng)域。本發(fā)明通過大腸桿菌重組質(zhì)粒外源表達獲得帶有His?tag的包涵體N?Lg?Flo1p，通過變性溶解及復(fù)性，經(jīng)Ni?NTA瓊脂糖凝膠6FF純化后，制得一種結(jié)合了N?Lg?Flo1p的新型親和吸附劑，經(jīng)檢測其吸附甘露低聚糖的能力達到10.14mg/mL，為甘露低聚糖特異性吸附劑的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種以酵母絮凝蛋白為配基的親和吸附劑及應(yīng)用，屬于生物化工領(lǐng)域。
背景技術(shù)
酵母絮凝蛋白(Lg-Flo1p)是由酵母菌基因組中典型的含基因內(nèi)重復(fù)序列的基因(統(tǒng)稱為FLO基因家族)編碼，由N端、C端和中間重復(fù)序列三個結(jié)構(gòu)域組成的細胞壁蛋白，這些蛋白的C端以共價鍵連接到細胞壁上，暴露的N端則可與相鄰酵母細胞壁的甘露糖殘基特異性結(jié)合導(dǎo)致絮凝。
甘露低聚糖不被人體胃腸道消化，可以促進生物體內(nèi)以雙歧桿菌為代表的腸道益生菌群的特異性增殖并抑制有害菌的生長，減少有毒代謝產(chǎn)物的生成，改善人體腸道功能的作用，防止便秘，保護肝臟，抗腫瘤及增強免疫力，可用作食品或飼料添加劑。甘露低聚糖具有低熱值、低甜度、不引發(fā)齲齒、不增加血糖濃度等特點，是新一代的功能性食品。
目前，甘露低聚糖的生產(chǎn)方法主要包括從天然原料中提取、化學(xué)降解及生物降解。前兩種方法的后期處理較為復(fù)雜，成本高，并且借助酸堿水解的化學(xué)法對環(huán)境的污染較大。生物降解的過程無毒且安全，反應(yīng)條件溫和。甘露低聚糖主要采用內(nèi)切甘露聚糖酶水解甘露聚糖獲得，但副反應(yīng)較多，分離純化有一定的困難，因此開發(fā)一種特異性吸附劑，將甘露聚糖酶解后的產(chǎn)物進行特異性分離，對單一甘露低聚糖的制備具有廣闊的應(yīng)用前景。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有的技術(shù)難點及存在的問題，本發(fā)明提供了一種以酵母絮凝蛋白(N-Lg-Flo1p)為配基的新型親和吸附劑，用于甘露低聚糖等功能性糖類物質(zhì)的分離純化。
本發(fā)明的第一個目的是提供一種親和吸附劑，所述吸附劑是以酵母絮凝蛋白(N-Lg-Flo1p)為配基，與瓊脂糖凝膠結(jié)合得到的。
在一種實施方式中，所述瓊脂糖凝膠為Ni-NTA瓊脂糖凝膠6FF或CNBr活化的瓊脂糖凝膠4B。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述酵母絮凝蛋白(N-Lg-Flo1p)攜帶6×組氨酸標簽。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述酵母絮凝蛋白N-Lg-Flo1p是從重組大腸桿菌中表達得到的。
在本發(fā)明的一種實施方式中，編碼所述酵母絮凝蛋白N-Lg-Flo1p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種以N-Lg-Flo1p為配基的親和吸附劑的制備方法，包括如下步驟：
(1)將含有Lg-Flo1p的N端基因序列的重組質(zhì)粒在大腸桿菌中進行表達，獲得外源包涵體N-Lg-Flo1p，并對其進行變性溶解及復(fù)性；
(2)吸取Ni-NTA瓊脂糖凝膠6FF 1mL裝柱子，用平衡緩沖液(20mM Tris-HCl、0.2mMNaCl)平衡10個柱體積；
(3)將N-Lg-Flo1p復(fù)性液(已測定蛋白含量)加入到吸附柱中純化，用5倍柱體積的平衡緩沖液洗柱，收集洗滌液，直到?jīng)]有蛋白流出，獲得。
本發(fā)明的第三個目的是提供一種采用上述親和吸附劑吸附甘露低聚糖的方法，包括如下步驟：
(1)將結(jié)合了N-Lg-Flo1p的Ni-NTA瓊脂糖凝膠6FF 1mL，加入到含有甘露低聚糖的溶液中，在轉(zhuǎn)速為80～100r/min振蕩0.5～1.5h；
(2)將吸附劑裝柱，用含有0.2M NaCl、pH4.5的20mM Tris-HCl緩沖液洗脫，收集甘露低聚糖。
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