[發明專利]一種基于超疏水微陣列芯片進行藥敏測試的方法

有效

• 申請號: 202010039448.X
• 申請日: 2020-01-15
• 公開（公告）號: CN111197068B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 劉鵬;胡亞偉;李愷怡;王憲寧
• 申請（專利權）人: 清華大學;奧格諾德生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/071;C12M3/00;C12M1/00
• 代理公司: 北京漢鼎理利專利代理事務所(特殊普通合伙) 11618
• 代理人: 潘滿根

1.一種非診斷目的的基于超疏水微陣列芯片進行藥敏測試的方法，其特征在于，在所述方法包括：將類器官在超疏水微陣列芯片微坑中培養得到類器官細胞，并在所述微坑中加入不同濃度的待測試藥物和細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料溶液，根據每個濃度的待測試藥物加入前后的細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料熒光值變化，根據以下公式得到所述待測藥物各個濃度下的細胞活力值，

其中CEV：每個藥物濃度下的細胞活力值；

T_AB-1：類器官細胞加藥組每個微坑中加藥前的細胞活力值；

T_AB-2：類器官細胞加藥組每個微坑中加藥后的細胞活力值；

VC_AB-1：類器官細胞空白對照組每個微坑中加藥前的細胞活力值，微坑中有類器官細胞和培養基；

VC_AB-2：類器官細胞空白對照組每個微坑中加藥后的細胞活力值，微坑中有類器官細胞和培養基；

NC_AB-1：細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料空基質膠每個微坑中加藥前的細胞活力值，微坑中無類器官細胞，有培養基；

NC_AB-2：細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料空基質膠每個微坑中加藥后的細胞活力值，微坑中無類器官細胞，有培養基；

n：每個藥物濃度重復的微坑數；

然后根據所述待測試藥物各個濃度下的細胞活力值，確定所述待測試藥物對所述類器官細胞的IC₅₀值。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟1：將所述類器官懸液接種于超疏水微陣列芯片上的微坑中，將類器官培養基使用自動點樣儀在玻片上點樣，然后使用微型對準儀將玻片與芯片對準，將所述類器官培養基加入含有類器官懸液的微坑中，培養得到所述類器官細胞；

步驟2：將步驟1中微坑中基質膠上的培養基刮去，將細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料溶液與類器官培養基配制成的細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料工作液使用自動點樣儀在玻片上點樣，然后使用微型對準儀將載有工作液的玻片與所述芯片對準；將所述待測試藥物稀釋成不同濃度，每個藥物濃度設置n個重復，另設置一組陰性對照，一組細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料空膠組作為本底熒光對照；加入不同濃度藥物之前，利用熒光顯微鏡對芯片微坑中熒光進行掃描，得到T_AB-1、VC_AB-1和NC_AB-1；

步驟3：加藥孵育完畢后，將基質膠上的含藥物的培養基刮去，再一次的將細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料溶液與類器官培養基配制成的細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料工作液使用自動點樣儀在玻片上點樣，然后使用微型對準儀將載有工作液的玻片與所述芯片對準，利用熒光顯微鏡對芯片微坑中熒光進行掃描，得到T_AB-2、VC_AB-2和NC_AB-2；和

步驟4：得到待測試藥物每個濃度重復下的細胞活力值，擬合曲線獲得所述待測試藥物對所述類器官細胞的IC₅₀值。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟1中，所述超疏水微陣列芯片固定在培養皿中，在所述芯片周圍加入無菌水，用封口膜封住培養皿。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟1中，所述微坑直徑為0.5-2mm，深度為100-300μm。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述微坑直徑為1mm，深度為200μm。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟1中，每個所述微坑接種5-10個類器官。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟2中，所利用無菌濾紙條將微坑中基質膠上的培養基刮去。

8.根據權利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述細胞增殖和/或細胞毒檢測熒光染料是阿爾瑪藍。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述類器官是腫瘤類器官。