[發(fā)明專利]一種冷凍保護(hù)劑及其應(yīng)用和一種精子冷凍液及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010037287.0
• 申請(qǐng)日: 2020-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN111149795A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余裕爐;葉林;劉洪君;嚴(yán)飛;戴甄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都艾偉孚生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 成都玖和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51238
• 代理人: 胡琳梅

本發(fā)明涉及輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種冷凍保護(hù)劑及其應(yīng)用和一種精子冷凍液及其制備方法，所述精子冷凍液包括冷凍保護(hù)劑、組合物和基礎(chǔ)培養(yǎng)液；其中，所述冷凍保護(hù)劑包括紫杉醇0.3～1.1mg/L、海藻糖16～22g/L、蔗糖7～13g/L和甘油80～250mL/L；所述組合物包括白藜蘆醇12～26mg/L、還原型谷胱甘肽0.2～1.9mg/L、卵磷脂436～775mg/L、膽固醇0.5～1.6mg/L、ATP鈉鹽9～17mg/L、肝素11～28mg/L、磷脂酰絲氨酸93～299mg/L和輔酶Q10 5～25mg/L；本發(fā)明的精子冷凍液能夠降低精子在低溫冷凍和冷凍復(fù)蘇過程中的損傷、提高精子冷凍復(fù)蘇后活力、延長精子冷凍復(fù)蘇后存活時(shí)間、促進(jìn)精子獲能以及增強(qiáng)精子對(duì)卵細(xì)胞的穿透受精能力，進(jìn)而提高卵子的受精成功率和囊胚形成率，最終達(dá)到提高體外受精輔助生殖技術(shù)的妊娠成功率的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種冷凍保護(hù)劑及其應(yīng)用和一種精子冷凍液及其制備方法。

背景技術(shù)

體外受精(in vitro fertilization，IVF)，又稱試管嬰兒，是一種輔助生殖治療的方法，具體是指分別將卵子與精子從體內(nèi)取出后，在體外特定的環(huán)境條件下使精子與卵子結(jié)合受精形成受精卵，待受精卵在體外連續(xù)培養(yǎng)發(fā)育至囊胚期胚胎后再將胚胎移植回母體子宮內(nèi)妊娠發(fā)育成胎兒。

在體外受精輔助生殖技術(shù)中，男性基于未來優(yōu)生優(yōu)育計(jì)劃的考慮，可將自身精子冷凍于具有相應(yīng)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)中，以防未來生育風(fēng)險(xiǎn)；各大精子庫和輔助生殖醫(yī)療機(jī)構(gòu)需要將經(jīng)檢驗(yàn)合格的精子進(jìn)行冷凍保存用作體外受精輔助生殖需要。同時(shí)，一些嚴(yán)重的少精弱精癥患者，為了防止日后發(fā)展成無精癥以致徹底喪失生育能力，也可以預(yù)先在治療少精癥的過程中將精子進(jìn)行冷凍長期保存，在后期需要時(shí)用于輔助生殖技術(shù)治療不孕不育，由此順利實(shí)現(xiàn)生育下一代的目的。

目前，市面上現(xiàn)有的精子冷凍液主要分為兩大類，分別是含卵黃和不含卵黃的，但其均存在一些缺點(diǎn)：一方面，由于卵黃中除含有卵磷脂外，還包括很多復(fù)雜成分，利用含卵黃的精子冷凍液進(jìn)行精子冷凍復(fù)蘇后會(huì)出現(xiàn)顆粒狀物質(zhì)，影響進(jìn)一步的處理過程，同時(shí)因卵黃屬于異種源物質(zhì)，還存在一定的生物風(fēng)險(xiǎn)；另一方面，不含卵黃的精子冷凍液因僅含有基礎(chǔ)鹽離子、少量氨基酸和單一的精子冷凍保護(hù)劑等，對(duì)精子的冷凍保護(hù)作用有限，存在很大的提升空間。

因此，我們亟需一種無雜質(zhì)、具有生物安全性和功能多樣性的精子冷凍液。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種精子冷凍液及其制備方法，以達(dá)到降低精子在低溫冷凍和冷凍復(fù)蘇過程中的損傷、提高精子冷凍復(fù)蘇后活力、延長精子冷凍復(fù)蘇后存活時(shí)間、促進(jìn)精子獲能以及增強(qiáng)精子對(duì)卵細(xì)胞的穿透受精能力，進(jìn)而提高卵子的受精成功率和囊胚形成率的效果。

本發(fā)明的另一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種冷凍保護(hù)劑及其應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種冷凍保護(hù)劑，包括紫杉醇、海藻糖、蔗糖和甘油。

一種冷凍保護(hù)劑的應(yīng)用，是將所述冷凍保護(hù)劑用于生殖細(xì)胞的冷凍保護(hù)，優(yōu)選為精子的冷凍保護(hù)。

一種精子冷凍液，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)液、冷凍保護(hù)劑和組合物，所述冷凍保護(hù)劑包括紫杉醇、海藻糖、蔗糖和甘油，所述組合物包括白藜蘆醇、還原型谷胱甘肽、卵磷脂、膽固醇、ATP鈉鹽、肝素、磷脂酰絲氨酸和輔酶Q10。

所述紫杉醇作為具有抗癌活性的二萜生物堿類化合物，是目前已發(fā)現(xiàn)的最優(yōu)秀的天然抗癌藥物，在臨床上已經(jīng)廣泛用于乳腺癌、卵巢癌和部分頭頸癌和肺癌的治療。同時(shí)，紫杉醇還能作為一種細(xì)胞骨架穩(wěn)定劑，增強(qiáng)α、β-微管蛋白二聚體的緊密聯(lián)系，增強(qiáng)微管交聯(lián)，促進(jìn)微管聚合和穩(wěn)定，對(duì)細(xì)胞超微骨架結(jié)構(gòu)微管的結(jié)合具有依賴性和可逆性。通過上述技術(shù)方案，利用所述紫杉醇的特異性結(jié)合方式來降低精子細(xì)胞內(nèi)部微管骨架的解聚，從而對(duì)精子細(xì)胞的骨架結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器的定位和功能起著重要的穩(wěn)定保護(hù)作用。