[發(fā)明專利]一種提高蟬擬青霉生物量的液體培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010035703.3
• 申請日: 2020-01-14
• 公開（公告）號: CN111154659A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 譚艾娟;艾仁麗
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/79
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標(biāo)事務(wù)有限公司 52002
• 代理人: 蘭艷文

本發(fā)明公開了一種提高蟬擬青霉生物量的液體培養(yǎng)方法，步驟：在PDA斜面固體培養(yǎng)基上于25℃條件下培養(yǎng)7d完成蟬擬青霉4606菌種活化；轉(zhuǎn)接至裝有50ml液體培養(yǎng)基的150ml三角瓶中，25℃，150r/min，振蕩培養(yǎng)72h～96h；菌體呈球狀且均勻分布于錐形瓶內(nèi)時，將所得種子菌體按照相應(yīng)的接種量需求接種到裝有150ml液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，25℃，150r/min，振蕩培養(yǎng)72h～96h；菌體呈球狀均勻分布于錐形瓶內(nèi)時，離心取沉淀物稱重獲得生物量。本發(fā)明采用蟬擬青霉4606作為實(shí)驗(yàn)對象，結(jié)合響應(yīng)面法驗(yàn)證影響蟬擬青霉液體培養(yǎng)下生物量變化的因素和參數(shù)設(shè)定范圍，得到一種提高蟬擬青霉生物量的液體培養(yǎng)方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物液體培養(yǎng)條件優(yōu)化，具體地涉及一種提高蟬擬青霉生物量的液體培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

蟬擬青霉Paecilomyces cicadae是我國的一種傳統(tǒng)中藥材，在功效上與冬蟲夏草極為相似，且與冬蟲夏草的無性型同屬。蟬擬青霉胞內(nèi)含有多種具有應(yīng)用價值的物質(zhì)，比如蟲草多糖、腺苷、氨基酸、蟲草素、麥角甾醇以及必需氨基酸等，這些物質(zhì)通常作為保健品以及部分藥品的成分，因此蟬擬青霉具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、抗疲勞應(yīng)激、解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜催眠等多種醫(yī)用效果，對該真菌進(jìn)行更深層次的研究有助于開發(fā)出更多低成本保健品以及醫(yī)用藥品。通過優(yōu)化液體培養(yǎng)條件，提升蟬擬青霉培養(yǎng)效率，增大其生物量，可以為其研究提供豐富的試驗(yàn)材料。

目前，關(guān)于蟬擬青霉液體培養(yǎng)條件優(yōu)化的報道很少，在已有的研究報道中，大多以正交試驗(yàn)方法為基礎(chǔ)展開對蟬擬青霉液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化。本申請以純凈無污染的高產(chǎn)菌株蟬擬青霉4606為原料，采用響應(yīng)面法優(yōu)化蟬擬青霉液體培養(yǎng)條件，確定液體培養(yǎng)的最佳條件，旨在為蟬擬青霉的進(jìn)一步研究以及開發(fā)利用提供技術(shù)參數(shù)和理論指導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于通過響應(yīng)面法優(yōu)化蟬擬青霉液體培養(yǎng)條件，確定最佳液體培養(yǎng)條件。

本發(fā)明的目的是采取以下技術(shù)方案達(dá)到的：

一種提高蟬擬青霉生物量的液體培養(yǎng)方法，包括以下步驟：在PDA斜面固體培養(yǎng)基上于25℃條件下培養(yǎng)7d完成蟬擬青霉4606菌種活化；轉(zhuǎn)接至裝有50ml液體培養(yǎng)基的150ml三角瓶中，在25℃，150r/min條件下，振蕩培養(yǎng)72h～96h；待菌體呈球狀且均勻分布于錐形瓶內(nèi)時，將所得種子菌體按照相應(yīng)的接種量需求接種到裝有150ml液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，在25℃，150r/min條件下，振蕩培養(yǎng)72h～96h；菌體呈球狀均勻分布于錐形瓶內(nèi)時，離心取沉淀物稱重獲得生物量；其中最佳液體培養(yǎng)條件為：葡萄糖20g/L、蛋白胨3g/L、酵母膏2g/L、KH₂PO₄ 1g/L、MgSO₄0.5g/L、接種量6.65％、pH為6.00、溫度24.01℃。

本發(fā)明是采用蟬擬青霉4606作為實(shí)驗(yàn)對象，結(jié)合響應(yīng)面法逐步驗(yàn)證影響蟬擬青霉液體培養(yǎng)下生物量的因素和參數(shù)設(shè)定范圍，最終得到一種提高蟬擬青霉生物量的液體培養(yǎng)方法。

附圖說明

圖1是PH和接種量對蟬擬青霉生物量的影響結(jié)果。

圖2是溫度和接種量對蟬擬青霉生物量的影響結(jié)果。

圖3是PH和溫度對蟬擬青霉生物量的影響結(jié)果。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明是通過以下實(shí)施例得出的：

一種提高蟬擬青霉生物量的液體培養(yǎng)方法，包括以下步驟：