[發明專利]基于雙位點基因組編輯獲得高油酸油菜的方法在審
| 申請號： | 202010034529.0 | 申請日： | 2020-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN111304236A | 公開（公告）日： | 2020-06-19 |
| 發明（設計）人： | 柳寒;華水金;林寶剛;朱建方;任韻 | 申請（專利權）人： | 浙江省農業科學院;湖州市農業科學研究院 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/113;A01H5/00;A01H6/20 |
| 代理公司： | 浙江千克知識產權代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 310021 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 雙位點 基因組 編輯 獲得 油酸 油菜 方法 | ||
1.基于雙位點基因組編輯獲得高油酸油菜的方法，其特征在于：包括以下步驟：
(1)選取能同時作用A5 FAD2和C5 FAD2的靶位點T1、T2和T3，其序列如下：
T1序列：5’-CCGCCCTTCACTGTCGGAGAACT-3’；
T2序列：5’-CGACGCCACCATTCCAACACTGG-3’；
T3序列：5’-TACTTAGCCTTCAACGTCTCGGG-3’；
(2)合成gRNA接頭引物，進行gRNA表達盒的組裝，將組裝好的gRNA表達盒連入pYLCRISPR/Cas9P35S-H載體中，完成A5 FAD2和C5 FAD2雙位點編輯載體的構建，載體命名為P35S：BnFAD2；
(3)將構建好的P35S：BnFAD2載體轉入農桿菌GV3101電轉感受態細胞；
(4)通過農桿菌介導的油菜下胚軸遺傳轉化方法轉化油菜，經過篩選獲得A5FAD2和C5FAD2同時發生突變的轉基因植株。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述gRNA接頭引物序列為：
BnFAD2T1-F：gtcAGTTCTCCGACAGTGAAGGG
BnFAD2T1-R：aaacCCCTTCACTGTCGGAGAAC；
BnFAD2T2-F：gtcaCGACGCCACCATTCCAACAC
BnFAD2T2-R：aaacGTGTTGGAATGGTGGCGTCG；
BnFAD2T3-F：attgTACTTAGCCTTCAACGTCTC
BnFAD2T3-R：aaacGAGACGTTGAAGGCTAAGTA。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述油菜為甘藍型油菜。
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