[發明專利]用于推算棕尾別麻蠅幼蟲期發育時間的分子標記、引物組合物、試劑盒及應用

有效

• 申請號: 202010031936.6
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111100933B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 郭亞東;任立品;李奕;曲一泓
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 長沙軒榮專利代理有限公司 43235
• 代理人: 羅莎

1.一種用于推算棕尾別麻蠅幼蟲期發育時間的生物標志物，其特征在于，所述生物標志物為SpGALM37.59目的基因，所述SpGALM37.59目的基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種根據權利要求1所述生物標志物設計的引物組合物，其特征在于，所述引物組合物為用于檢測SpGALM37.59目的基因的引物組合物；

所述用于檢測SpGALM37.59目的基因的引物組合物包括GALM-F和GALM-R，所述GALM-F的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，所述GALM-R的DNA序列如SEQ ID NO.4所示；

還包括用于檢測SpTY3H137.42內參基因的引物組合物，所述SpTY3H137.42內參基因的DNA序列如SEQ ID NO.2所示；所述用于檢測SpTY3H137.42內參基因的引物組合物包括TY3H-F和和TY3H-R，所述TY3H-F的DNA序列如SEQ ID NO.5所示，所述TY3H-R的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。

3.一種用于推算棕尾別麻蠅幼蟲期發育時間的試劑盒，其特征在于，包括緩沖液和權利要求2所述的引物組合物。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述緩沖液包括T5 Fast qPCR Mix、ROXReference Dye II和ddH₂O。

5.一種權利要求3至4中任一項所述試劑盒在推算棕尾別麻蠅幼蟲期發育時間中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述應用方法包括以下步驟：

S1、以不同發育時間的棕尾別麻蠅的cDNA為模板，通過權利要求3所述的引物組合物，進行差異基因的qRT-PCR擴增得到擴增產物；

S2、對所述擴增產物進行熒光定量分析獲得棕尾別麻蠅的表達量；

S3、繪制表達量和發育時間的線性回歸方程：

Y＝-9.891×X+19.04，所述Y為發育時間，單位為h，所述X為SpGALM37.59基因的CT值減去SpTY3H137.42內參基因的CT值；

S4、通過檢測待測棕尾別麻蠅的cDNA的SpGALM37.59基因的CT值計算棕尾別麻蠅的發育時間。