[發明專利]一種表達類胡蘿卜素的融合基因、重組質粒及應用有效
| 申請號： | 202010031666.9 | 申請日： | 2020-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN111334519B | 公開（公告）日： | 2021-06-08 |
| 發明（設計）人： | 何明霞;王潔琳;林淵源;黃俊潮 | 申請（專利權）人： | 中國科學院昆明植物研究所 |
| 主分類號： | C12N15/62 | 分類號： | C12N15/62;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/10;A01H6/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津英揚昊睿專利代理事務所(普通合伙) 12227 | 代理人： | 徐忠麗 |
| 地址： | 650201 *** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 類胡蘿卜素 融合 基因 重組 質粒 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種在亞麻薺種子中表達類胡蘿卜素的方法，其特征在于，包括以下步驟：利用農桿菌花序侵染法將重組菌侵染亞麻薺的花序部分；
所述重組菌包含重組質粒；所述重組質粒以PBI121為基礎載體，將表達類胡蘿卜素的融合基因構建到NAPIN啟動子下游；所述重組菌以農桿菌為基礎菌株；
所述融合基因的結構包括：5’-八氫番茄紅素合成酶基因CrtB-羥化酶基因HpBHY-β-胡蘿卜素酮化酶基因CrBKT-促進類胡蘿卜素合成基因Orange-3’；相鄰兩個基因間以2A序列連接；所述融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
在所述侵染后，還包括將所述亞麻薺的植株培育至果莢成熟，收集種子，并對種子進行轉基因驗證。
2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述轉基因驗證包括觀察，當所述種子呈紅色時，表示轉基因成功；當所述種子呈黃色時，表示轉基因未成功。
3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述轉基因驗證包括PCR驗證，所述PCR驗證的引物包括正向引物F和反向引物R，所述正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
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