[發明專利]一種降低核酸擴增復制滑移率的方法

有效

• 申請號: 202010030832.3
• 申請日: 2020-01-13
• 公開（公告）號: CN111154820B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 趙偉;唐嘉婕;高鵬飛;楊敬敏;李文濤
• 申請（專利權）人: 上海韋翰斯生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6848
• 分類號: C12Q1/6848;C12P19/34
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 嚴晨;許亦琳

1.一種降低核酸擴增復制滑移率的方法，包括：在SD聚合酶存在的條件下對模板核酸進行擴增30～40個循環，以提供擴增產物，所述模板核酸包括重復序列，所述重復序列包括多個重復單元，所述對模板核酸進行擴增中所使用的PCR體系包括模板核酸、SD聚合酶、鎂離子、甜菜堿，所述PCR體系中模板核酸的濃度為2-200ng/μL，SD聚合酶的濃度為0.02-0.08U/μL，甜菜堿的濃度為0.5-2.5M，鎂離子的濃度為3-3.5mM，所述擴增產物的復制滑移率≤8％；

復制滑移率＝復制滑移片段峰面積/(目標片段峰面積+復制滑移片段峰面積)×100％。

2.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述擴增產物的非特異性擴增率≤8％；

非特異性擴增率＝(復制滑移片段峰面積+其他非目的產物峰面積)/(復制滑移片段峰面積+其他非目的產物峰面積+目標片段峰面積)×100％。

3.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述重復序列中，重復單元的長度為1～20個bp；

和/或，所述重復序列包括3～5個重復單元，模板核酸的長度不大于1000bp。

4.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述重復序列中，重復單元的長度為1～6個bp。

5.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述重復序列中，重復單元的長度為3～5bp。

6.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述重復序列中，所述重復單元為ATAG。

7.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述PCR體系還包括dNTPs、針對所述模板核酸的上游引物和下游引物；

和/或，所述PCR體系還包括水性介質、緩沖液中的一種或多種的組合。

8.如權利要求7所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述PCR體系中，dNTPs的濃度為0.3-0.4mM，上游引物的濃度為0.3-0.6mM，下游引物的濃度為0.3-0.6mM；和/或，所述緩沖液選自SD聚合酶緩沖液。

9.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述對模板進行擴增中擴增30～35個循環。

10.如權利要求1所述的降低核酸擴增復制滑移率的方法，其特征在于，所述對模板進行擴增中，擴增進行35個循環。

11.SD聚合酶在降低核酸擴增復制滑移率中的用途。