[發明專利]一種標記黃瓜果形基因的引物、基因序列、黃瓜果形的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202010026358.7
• 申請日: 2020-01-10
• 公開（公告）號: CN111440791A
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 潘玉朋;孟煥文;程智慧
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 孫雅靜

1.一種標記黃瓜果形基因的引物，其特征在于，所述引物具體為：

CsSun-Indel_F:5’-GAAATCCTTCTACTCCGAAACAGA-3’；

CsSun-Indel_R:5’-TTCCTCGCCTAATTTCACCAA-3’。

2.一種黃瓜果形的檢測方法，其特征在于，利用權力要求1所述的標記黃瓜果形基因的引物。

3.如權利要求2所述的黃瓜果形的檢測方法，其特征在于，采用PCR擴增方法檢測判定，具體包括如下步驟：

(1)提取待測品種基因組DNA；

(2)以步驟(1)中所提取的基因組DNA為模板，利用所述分子標記CsSun-Indel進行PCR擴增，對PCR擴增產物進行8％丙烯酰胺凝膠電泳檢測和/或測序；

(3)依據步驟(2)的電泳條帶和/或測序結果進行判定。

4.如權利要求3所述的黃瓜果形的檢測方法，其特征在于，基于PCR產物電泳結果判定：

如果電泳條帶僅有一種140bp帶型，判定待測品種為短果形品種；

如果電泳條帶僅有一種300bp帶型，判定待測品種為長果形品種；

如果電泳條帶有140bp和300bp兩種帶型，判定待測品種為雜合型的長果形品種。

5.如權利要求4所述的黃瓜果形的檢測方法，其特征在于，140bp特征條帶的具體堿基序列為：SEQ ID NO.3，300bp特征條帶的具體堿基序列為：SEQ ID NO.4。

6.如權利要求3所述的黃瓜果形的檢測方法，其特征在于，基于測序結果判定：

如果基于測序結果為一種且與SEQ ID NO.3相同，判定待測品種為短果形品種；

如果基于測序結果為一種且與SEQ ID NO.4相同，判定待測品種為長果形品種；

如果基于測序結果為兩種且與SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4相同，判定待測品種為雜合型的長果形品種。

7.如權利要求3所述黃瓜果形的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，采用CTAB法提取其基因組DNA。

8.如權利要求3所述黃瓜果形的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，PCR擴增時，10μL擴增體系設計如下：

基因組DNA，1μL；

CsSun-Indel_F，0.5μL；

CsSun-Indel_R，0.5μL；

2X TaqMix，5.0μL；

ddH₂O，3.0μL；

PCR擴增程序為：

第一程序：94℃、3min；

第二程序：94℃、20s，68℃、20s，72℃、20s；并依次按94℃、20s，68℃(每循環降2℃)、20s，72℃、20s的順序走6個循環；

第三程序：94℃、20s，58℃、20s，72℃、20s；并依次按94℃、20s，58℃(每循環降1℃)、20s，72℃、20s的順序走8個循環；

第四程序：94℃、20s，50℃、20s，72℃、20s；并依次按94℃、20s，50℃、20s，72℃、20s的順序走20個循環；

第五程序：72℃、5min。

9.一種黃瓜果形基因的標記基因序列，其特征在于，具體為SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4，用于判定黃瓜長短果形品種。

10.權利要求1所述的標記黃瓜長短基因的引物用于制備鑒定黃瓜品種試劑盒的應用，該分子標記CsSun-Indel與黃瓜果形調控基因CsSUN共分離，利用該分子標記來檢測黃瓜果形，用于黃瓜果形遺傳改良的分子輔助選擇。