[發明專利]一種基于氧化銅和納米鉑增強魯米諾發光的信號雙放大型電化學發光傳感器的構建方法

在審

• 申請號: 202010020074.7
• 申請日: 2020-01-09
• 公開（公告）號: CN111208177A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 宋先震;魏琴;羅川南;孫曉君;任祥;范大偉;代笠
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 趙鳳

1.一種基于氧化銅和納米鉑增強魯米諾發光的信號雙放大型電化學發光傳感器的構建方法，其特征在于：

將玻碳電極用三氧化二鋁Al₂O₃泥漿拋光至鏡狀表面，超純水沖洗干凈；將拋光好的電極浸入質量分數為1 %的氯金酸HAuCl₄溶液中，在-0.2 V的恒定電壓下沉積一層金納米粒子AuNPs，沉積時間為40 s；將10 μL制備的PtNPs滴在沉積好的電極表面，室溫保存至干燥；將修飾后的電極浸入50 ng/mL的HGC溶液中1 h以結合一定量的HGC；將10 μL 5 μg/mL的一抗Ab₁滴在電極表面，4 ^oC下孵化2 h；將3 μL質量分數為1 %的牛血清白蛋白BSA滴在電極表面，封閉Ab₁上非特異性活性位點；將6 μL不同濃度的PCT滴在電極表面，4 ^oC下孵化1 h；將10 μL 2-8 μg/mL的Ab₂-Luminol-Au@BSA-CuO滴在電極表面，4 ^oC下孵化2 h，即實現了基于氧化銅和納米鉑增強魯米諾發光的信號雙放大型電化學發光傳感器的構建；

如上所述傳感器構建過程中，每一步都需將所得修飾后電極用超純水輕輕沖洗，以去除未結合的生物分子。

2.一種基于氧化銅和納米鉑增強魯米諾發光的信號雙放大型電化學發光傳感器的構建方法，關于CuO和PtNPs的制備，其特征在于，步驟如下：

將1 g五水合硫酸銅CuSO₄?5H₂O溶于60 mL超純水中，磁力攪拌至完全溶解，得到藍色溶液；隨后，加入6 g聚乙烯吡咯烷酮PVP，攪拌至完全溶解，溶液顏色變為藍綠色，再依次加入6 g尿素和2 mL H₂O₂，繼續攪拌1 h以充分反應；接下來，將上述溶液轉移至高溫高壓反應釜中，120 ^oC下反應4 h，將反應所得墨綠色溶液離心，依次用水和乙醇洗滌，并將離心產物在60 ^oC下烘干；最后將制得前驅體在600 ^oC下煅燒2 h，即制得黑色的CuO粉末，并將其溶于超純水中備用；

將3 mL 10 mM的氯鉑酸H₂PtCl₆溶液和0.5 mL 0.1 M的氫氧化鈉NaOH溶液攪拌混合；然后在攪拌下將0.5 mL 0.1 M的抗壞血酸AA溶液緩慢添加到上述溶液中，再將混合物在60^oC下水浴加熱30 min；最后將所得溶液離心洗滌，即制得PtNPs，并將其溶于超純水中備用。

3.如權利要求1所述的一種基于氧化銅和納米鉑增強魯米諾發光的信號雙放大型電化學發光傳感器的構建方法，所述Au@BSA的制備，其特征在于，步驟如下：

首先，將1 mL質量分數為1 %的HAuCl₄分散于50 mL超純水中；隨后，在劇烈攪拌下加入2mL質量分數為1 %的檸檬酸鈉溶液，煮沸10 min，繼續攪拌20 min后，將溶液冷卻至室溫；

接下來，將500 mg BSA加入上述溶液，待完全溶解后繼續加入40 mg硼氫化鈉NaBH₄，室溫反應24 h；最后，將所得溶液離心洗滌，冷凍干燥，即成功制得BSA改性的AuNPs，并取3 mg制得的Au@BSA粉末溶于5 mL超純水中備用。