[發(fā)明專利]一種用地高辛標(biāo)記寡核苷酸著絲粒探針應(yīng)用于原位雜交的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010017374.X
• 申請日: 2020-01-08
• 公開（公告）號: CN112280826A9
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市外顯子生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供了一種用地高辛標(biāo)記原位雜交著絲粒探針的方法，屬于分子生物學(xué)核酸標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域。該用地高辛標(biāo)記原位雜交著絲粒探針的方法，主要用于將地高辛標(biāo)記到著絲粒探針上，然后該著絲粒探針能應(yīng)用于FISH探針，達(dá)到檢測著絲粒變化的目的。本發(fā)明提供的用地高辛標(biāo)記原位雜交著絲粒探針的方法能有效標(biāo)記地高辛分子到寡核苷酸上，可應(yīng)用于分子標(biāo)記和臨床分子診斷的研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)核酸標(biāo)記領(lǐng)域，具體涉及寡核苷酸探針的標(biāo)記，將地高辛分子標(biāo)記到寡核苷酸著絲粒探針上，繼續(xù)用于原位雜交檢測著絲粒的應(yīng)用。

背景技術(shù)

在分子生物領(lǐng)域內(nèi)，核酸探針標(biāo)記已經(jīng)在70年代被發(fā)現(xiàn)，但是具體到實驗室或試劑研發(fā)內(nèi)部工作，其技術(shù)尚不成熟、環(huán)節(jié)多，往往失敗。主要原因是其步驟較多，用到的試劑多且復(fù)雜。從放射性標(biāo)記的發(fā)展，到如今的非放射性技術(shù)的廣泛應(yīng)用。探針標(biāo)記的需求日益增多。因此，尋找便捷快速的探針標(biāo)記技術(shù)成為迫切解決的問題。基因組被破解，基因序列正在被解釋，各種核酸探針的需求日益增多。但核酸探針的制備非常復(fù)雜，制備方法也很多。非放射性標(biāo)記被廣泛用于研究，寡核苷酸合成日益增多，獲得大量的寡核苷酸不是一件困難的事情。公認(rèn)的傳統(tǒng)的核酸標(biāo)記是利用核酸的5端和3端，隨機引物，寡核苷酸合成等，但是步驟繁瑣，大部分實驗室都在標(biāo)記實驗中失敗多，不能很好的完成探針的標(biāo)記。國外某品牌標(biāo)記地高辛DNA核酸或寡核酸需要對標(biāo)本進行復(fù)雜的處理步驟。

鑒于上述原因，我們在合成寡核苷酸中進行了NH2修飾，HPLC純化后，采用中和法，進行地高辛標(biāo)記。將其應(yīng)用于FISH檢測，獲得良好的效果。我們驗證多次，容易獲得成功，該方法是一種快速的地高辛探針標(biāo)記寡核苷酸的方法，值得在分子生物學(xué)中和診斷學(xué)中應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的：在于提供一種地高辛標(biāo)記寡核苷酸著絲粒探針，然后將其應(yīng)用于FISH檢測方法中觀察著絲粒的變化。

發(fā)明人利用NH2和Digoxion-NHS反應(yīng)原理以及堿基互補的原理，采用中和法對標(biāo)記地高辛的寡核苷酸處理，標(biāo)記著絲粒探針，然后進行原位雜交，對獲得著絲粒的FISH探針進行驗證。上述發(fā)明滿足了分子生物學(xué)或診斷實驗的需要。簡化了既往標(biāo)記地高辛前反復(fù)純化寡核苷酸的步驟。

發(fā)明過程

發(fā)明人通過優(yōu)化標(biāo)記的幾種溶液，如下。

通過優(yōu)化A溶液，具體濃度：0.2mol/L NaHCO₃(pH8.8)。

進一步地，優(yōu)化B溶液和Cy3染料：具體濃度：3mol/L醋酸鈉（pH5.5）。進行標(biāo)記。

進一步地，利用上述標(biāo)記的探針對中期染色體進行檢測。案例一。

綜上分析：本發(fā)明成功獲得了地高辛標(biāo)記著絲粒探針應(yīng)用于原位雜交的方法，且本發(fā)明已證明該過程能有效標(biāo)記地高辛分子到寡核苷酸探針，可作為標(biāo)記寡核苷酸的方法，應(yīng)用于基礎(chǔ)和分子診斷試劑的研究。

本發(fā)明的檢測效果：本發(fā)明能將標(biāo)記地高辛分子到寡核苷酸上，可作為研究分子標(biāo)記和臨床分子診斷的研究。

附圖說明

圖1為標(biāo)記的探針驗證外周血的染色體結(jié)果，紅色信號是探針信；

具體實施方式

、探針標(biāo)記溶液的配制過程：

A溶液：0.2mol/L NaHCO₃(pH8.7)