[發(fā)明專利]一種雙佐劑-新抗原腫瘤納米疫苗及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010007226.X
• 申請(qǐng)日: 2020-01-04
• 公開（公告）號(hào): CN111068047A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳小元;倪倩倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 莎穆（上海）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K39/39;A61K47/60;A61K47/64;A61K47/69;A61P35/00;A61P37/04
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11333
• 代理人: 劉俊玲

1.一種納米疫苗，其特征在于：它是同時(shí)裝載有腫瘤新生抗原及其兩種佐劑的納米顆粒。

2.權(quán)利要求1所述的納米疫苗，其特征在于：所述的腫瘤新生抗原選自含有Adpgk肽段的多肽抗原、SIINFEKL抗原或標(biāo)記FITC熒光分子的模型抗原(CSIINFEK_(FITC)L)中的任意一種，優(yōu)選含有Adpgk肽段的多肽抗原；所述的兩種佐劑包括TLR7/8a激動(dòng)劑和TLR9a激動(dòng)劑，所述的TLR7/8a激動(dòng)劑優(yōu)選R848小分子佐劑，所述的TLR9a激動(dòng)劑優(yōu)選CpG寡核苷酸。

3.權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述的所述的納米疫苗，其特征在于：所述的納米疫苗中還含有兩親性聚合物；所述的兩親性聚合物優(yōu)選聚乙二醇-聚乳酸(PEG-b-PLA)和式(I)所示的聚乙二醇修飾的多肽(PPT-g-PEG)

其中，n和m的和為1，p和q的取值范圍均在40～50；優(yōu)選n和m的和為1且n大于m，p和q均為45-50；最優(yōu)選n取0.87，m取值范圍是0.13，p和q均為45。

4.權(quán)利要求1所述的納米疫苗，其特征在于：所述的納米疫苗是通過以下過程得到的組合物納米顆粒：PEG-b-PLA和CpG寡核苷酸先聚合組裝得到內(nèi)部為疏水結(jié)構(gòu)的微粒，再利用所述疏水結(jié)構(gòu)裝載小分子佐劑R848至所述微粒內(nèi)部，然后通過所述微粒中的CpG寡核苷酸和PPT-g-PEG壓縮組裝，得到表面分布PPT-g-PEG的納米顆粒，最后利用所述納米顆粒表面PPT-g-PEG的親疏水作用裝載所述的腫瘤新生抗原。

5.一種用于制備所述納米疫苗的組合物，包括：

小分子佐劑R848；

末端修飾馬來酰胺鍵的含聚乙二醇鏈段的兩親性二嵌段聚合物；

核酸佐劑CpG，包括5’端為巰基修飾的DNA引物片段以及含有兩段以上CpG或GpC反義序列的長(zhǎng)鏈DNA模板片段；

聚乙二醇修飾的聚多肽；

和

腫瘤新生抗原；優(yōu)選多肽抗原Adpgk、SIINFEKL抗原或CSIINFEK_(FITC)L中的任意一種。

6.權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于：所述的末端修飾的馬來酰胺鍵的含聚乙二醇鏈段的兩親性二嵌段聚合物優(yōu)選MAL-PEG-PLA；更優(yōu)選MAL-PEG3000-PLA2000。

7.權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于：所述的5’端為巰基修飾的DNA引物片段優(yōu)選如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示核苷酸序列的片段，所述的含有兩段以上CpG(GpC)反義序列的長(zhǎng)鏈DNA模板片段是含有三段CpG或GpC反義序列的長(zhǎng)鏈DNA模板片段；更優(yōu)選如SEQID No.3或SEQ ID No.4所示核苷酸序列的片段。

8.權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于，所述的聚乙二醇修飾的聚多肽由以下方法制備：

1)L-谷氨酸與氯三甲基硅烷在炔丙醇中反應(yīng)制備γ-炔丙基-L-谷氨酸鹽酸鹽；

2)用1)所得γ-炔丙基-L-谷氨酸鹽酸鹽與雙碳酸酯反應(yīng)生成γ-炔丙基-L-谷氨酸N-羧酸酐PLG NCA；

3)用2)得到的γ-炔丙基-L-谷氨酸N-羧酸酐與3-甲氧基丙胺反應(yīng)，得到聚多肽PPT；

4)用3)得到的聚多肽PPT與2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮、半胱胺鹽酸鹽混合反應(yīng)并紫外光照處理，得到陽離子聚多肽半胱氨酸鹽酸鹽cPPT；

5)用4)得到的陽離子聚多肽半胱氨酸鹽酸鹽cPPT與醛基聚乙二醇反應(yīng)得到聚乙二醇修飾的聚多肽。