[發(fā)明專利]一種嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010006115.7
• 申請(qǐng)日: 2020-01-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111175511A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊金易;王序;曾道平;蘇曉娜;譚庶;盧迪莎;吳穎;許小炫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/53
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 李小婷

1.一種嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l，其特征在于，包括底板，所述底板上貼有反應(yīng)膜；反應(yīng)膜的一端覆蓋吸水墊，另一端依次覆蓋結(jié)合墊和樣品墊；所述反應(yīng)膜的非覆蓋面上沿橫向設(shè)置有檢測(cè)線和質(zhì)控線；

所述結(jié)合墊上噴涂有聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球標(biāo)記的嘔吐毒素單克隆抗體的熒光探針；

所述檢測(cè)線上包被有嘔吐毒素完全抗原，所述質(zhì)控線上包被有山羊抗鼠二抗抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l，其特征在于，所述聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球標(biāo)記的嘔吐毒素單克隆抗體的熒光探針，是將活化后的聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球與嘔吐毒素單克隆抗體按體積比8～12：1偶聯(lián)后，加入牛血清蛋白(BSA)作封閉液得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l，其特征在于，所述聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球的活化方法為：向羧基化的聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球溶液中，加入由碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)組成的活化劑進(jìn)行活化得到；所述羧基化的聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球溶液與EDC和NHS的體積比為1～3：3：4；

所述聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球采用四聯(lián)苯乙烯酸四甲酯制備而成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l，其特征在于，所述嘔吐毒素完全抗原是：以式(I)所示化合物為嘔吐毒素半抗原，與載體蛋白偶聯(lián)，得到嘔吐毒素完全抗原；所述載體蛋白為雞卵清白蛋白(OVA)或牛血清蛋白(BSA)；

其中，嘔吐毒素半抗原為式(I)所示化合物：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l，其特征在于，所述嘔吐毒素單克隆抗體是：以所述嘔吐毒素完全抗原作為免疫原，去免疫動(dòng)物發(fā)生特異性免疫反應(yīng)后，獲得嘔吐毒素單克隆抗體。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l，其特征在于，所述嘔吐毒素半抗原的制備方法如下：將嘔吐毒素溶解于乙二醇二甲醚中，加入氫化鈉將嘔吐毒素的羧基活化后偶聯(lián)上丁二酸酐，避免嘔吐毒素4號(hào)位和5號(hào)位的羧基被取代，再利用3-溴丙酸甲酯取代嘔吐毒素4號(hào)位和5號(hào)位羧基上的氫，再于堿性條件下還原丁二酸酐，即得。

7.權(quán)利要求1～6任一所述嘔吐毒素?zé)晒饷庖邔游鲈嚰垪l的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將嘔吐毒素半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，得到嘔吐毒素完全抗原；以該嘔吐毒素完全抗原作為免疫原，去免疫動(dòng)物發(fā)生特異性免疫反應(yīng)后，獲得嘔吐毒素單克隆抗體；

S2.采用EDC和NHS活化后的羧基化的聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球，對(duì)嘔吐毒素單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，加入牛血清蛋白(BSA)溶液進(jìn)行封閉，得到聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球標(biāo)記的嘔吐毒素單克隆抗體的熒光探針；

然后將聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球標(biāo)記的嘔吐毒素單克隆抗體的熒光探針噴涂于結(jié)合墊上；

S3.在反應(yīng)膜的檢測(cè)線位置包被嘔吐毒素完全抗原，檢測(cè)線包被濃度為0.6～1.4mg/mL；在反應(yīng)膜的質(zhì)控線位置包被山羊抗鼠二抗抗體，質(zhì)控線包被濃度為1.6～2.4mg/mL；

S4.在底板上依次搭接樣品墊、結(jié)合墊、反應(yīng)膜和吸水墊，即得。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中，嘔吐毒素單克隆抗體與聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光微球的質(zhì)量體積比為1μg：6～14μL，于100～300rpm、24～26℃條件下進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)35～45min；

所述BSA溶液的用量為16～24μL，濃度為16％～24％。