[發明專利]一株乙酰微小桿菌及其在防治植物寄生線蟲病上的應用

在審

• 申請號: 202010003186.1
• 申請日: 2020-01-02
• 公開（公告）號: CN110951656A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 周波;王建宇;張曉春;王冰;林榕姍;趙鵬;李根;于豐源
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/20;A01P5/00;C12R1/01
• 代理公司: 濟南竹森知識產權代理事務所(普通合伙) 37270
• 代理人: 朱家富

1.一株乙酰微小桿菌(Exiguobacterium acetylicum)AMCC 101217，于2018年08月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，菌種保藏編號為CGMCC No.16305。

2.權利要求1所述乙酰微小桿菌AMCC 101217微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)菌種活化：將乙酰微小桿菌(Exiguobacterium acetylicum)AMCC 101217接種于LB固體培養基平板上，于35-37℃培養22-27h；

(2)種子液制備：將活化好的AMCC101217接種于LB液體培養基中，于35-37℃，150-220rpm培養18-22h；

(3)種子液擴大培養：將步驟(2)中的種子液以5-8％的接種量接種到種子液擴大培養基中，所述的擴大培養基為LB液體培養基，于35-37℃，150-220rpm培養10-13h；

(4)發酵培養：將步驟(3)中擴大培養的種子液以5-8％的接種量接種到LANDY發酵培養基，35-37℃，150-220rpm培養22-27h，得到AMCC101217液體菌劑；

所述LANDY發酵培養基，每升包括如下組分：葡萄糖18.0-20.0g，L-谷氨酸4.0-5.0g，磷酸二氫鉀0.8-1.0g，七水硫酸鎂0.4-0.5g，氯化鉀0.4-0.5g，酵母粉1.0-1.2g，L-苯丙氨酸(1.8-2.4)×10^-3g，硫酸錳(4.5-5)×10^-3g，硫酸銅(0.16-0.18)×10^-3g，七水硫酸亞鐵(0.15-0.17)×10^-3g，余量水，pH6.8-7.3。

3.如權利要求2所述乙酰微小桿菌AMCC 101217微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)接種后LB固體培養基平板，于37℃培養24h。

4.如權利要求2所述乙酰微小桿菌AMCC 101217微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)接種后的LB液體培養基于37℃，180rpm培養18h。

5.如權利要求2所述乙酰微小桿菌AMCC 101217微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)接種后的種子液擴大培養基，于37℃，200rpm，培養10h。

6.如權利要求2所述乙酰微小桿菌AMCC 101217微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中發酵培養于37℃，200rpm培養24h。

7.如權利要求2所述乙酰微小桿菌AMCC 101217微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中的LANDY發酵培養基，每升包括如下組分：葡萄糖20.0g，L-谷氨酸5.0g，磷酸二氫鉀1.0g，七水硫酸鎂0.5g，氯化鉀0.5g，酵母粉1.0g，L-苯丙氨酸2×10^-3g，硫酸錳5×10^-3g，硫酸銅0.16×10^-3g，七水硫酸亞鐵0.15×10^-3g，余量水，pH7.0。

8.一種液體微生物菌劑，其特征在于，含有權利要求1所述乙酰微小桿菌AMCC101217菌株，菌體濃度為1.0×10⁷-2.5×10⁸CFU/mL。

9.權利要求1所述乙酰微小桿菌AMCC101217菌株在防治由一種或多種線蟲引起的病害中的應用；

優選的，所述線蟲為：南方根結線蟲、象耳豆根結線蟲、松材線蟲之一或兩種以上的組合。

10.權利要求8所述乙酰微小桿菌AMCC101217菌劑在防治由一種或多種線蟲引起的病害中的應用；

優選的，所述線蟲為：南方根結線蟲、象耳豆根結線蟲、松材線蟲之一或兩種以上的組合。